Укр
Рус Укр Eng

Гістологічний аналіз

Гістологічне дослідження включає процедуру відбору невеликого зразка тканини для дослідження, яке зазвичай проводиться патологоанатомом, і швидкого занурення в розчин фіксатора відповідних властивостей.

Гістологічний матеріал вимагає ретельної підготовки. Вона проходить в кілька етапів:

  • фіксація;
  • проводка;
  • заливка;
  • різання (мікротомів);
  • фарбування;
  • висновок.

Фіксація

Процес фіксації полягає в збереженні структури і характерних особливостей тканини і попередженні процесу аутолізу. Дуже важливо використовувати розчин фіксатора, що забезпечує збереження тканин і клітин в максимально наближеному до живого стані за допомогою стійких хімічних сполук.

Для гістологічного аналізу шкіри як фіксатор виступає речовина з наступними властивостями:

  • швидко проникає в тканини;
  • фіксує всі частини клітин;
  • дозволяє використовувати всі види барвників.

Ідеальний фіксатор має не тільки утворювати стабільні з’єднання з усіма цими речовинами, а й робити їх нерозчинними як в жирових розчинниках, так і у воді. Фіксація завжди призводить до великих або менших змін структури і об’єму тканини, ступінь вираженості яких залежить від рН фіксатора, його концентрації, температури, тривалості впливу та інших факторів. Концентрація іонів водню фіксатора повинна відповідати такій в тканинах, тому фіксатор має мати рН, близький до нейтрального. Обсяг фіксатора має перевищувати обсяг фіксованої матеріалу в 10-20 разів, оскільки тканинна рідина може істотно змінити концентрацію фіксатора.

Читайте також: Мікроскопи Leica: огляд рішень для біомедичних досліджень

Формалін

Один з найпоширеніших фіксаторів в гістології. Його дія полягає в з’єднанні мембранних білків через утворення ковалентних зв’язків. Він проводиться шляхом розчинення комерційного формальдегіду у водному фосфатному буфері. Звичайна концентрація становить 10% (або 4% формальдегіду). Речовина швидко проникає всередину, не руйнує ні один з клітинних компонентів і дозволяє використовувати практично всі методи фарбування.

Для оптимального ефекту фіксації різних тканин рекомендується використовувати формалін 10% з нейтральним рівнем pH (наприклад Формалін гістологічний 10% Leica Neutral Buffered Formalin)

Формалін гістологічний 10% Leica Neutral Buffered Formalin

Формалін гістологічний 10% Leica Neutral Buffered Formalin

Проводка (зневоднення, інфільтрація) і заливка в парафін

Для зневоднення матеріалу зазвичай використовують кілька порцій етилового спирту висхідної міцності.

Для видалення спирту та підготовки до просочування парафіном матеріал обробляють одним з розчинників парафіну, що має здатність витісняти спирт. До таких речовин відносяться ксилол, який повинен бути добре очищений (наприклад, Ксилол для гістології, очищена суміш Surgipath Xylenes, 5 л / уп, Leica Biosystems).

Ксилол для гістології, очищена суміш Surgipath Xylenes

Ксилол для гістології, очищена суміш Surgipath Xylenes

Для повного насичення тканини парафіном шматочки тканини проводять послідовно через дві-три порції розплавленого парафіну (процес інфільтрації). Для якісного процесу інфільтрації і подальшого заливання необхідно використовувати парафін, який містить в своєму складі полімерні частинки для його необхідної в’язкості (наприклад, Парафін гістологічний Leica Formula R, 0,9 кг / уп, Leica Biosystems)

Парафін гістологічний Leica Formula R

Парафін гістологічний Leica Formula R

Час перебування в парафіні залежить від величини шматочків тканини і їхніх властивостей.

Читайте також: Як правильно чистити оптику мікроскопа

Різка (мікротомів)

Гістологічний аналіз передбачає особливу увагу до процесу нарізування, оскільки досить тонкі зрізи забезпечують чіткість і точність дослідження найдрібніших деталей клітин за допомогою світлових мікроскопів.

Різка здійснюється спеціальними інструментами, мікротомами, переважно роторними, які здатні робити надрізи товщиною від 1 μm.

У процесі різання (мікротомів) особливу увагу потрібно приділяти якості лез. Обирати їх слід в залежності від типу утримувача лез в мікротомі (низький профіль, високий профіль), також ці леза мають бути якісні, що дасть можливысть створити препарат без недоліків (наприклад, для низькопрофільних – Змінні леза Leica для мікротомів, тип 819, низький профіль, 50 шт / уп, Leica Biosystems)

Змінні леза Leica для мікротомів

Змінні леза Leica для мікротомів

Фарбування

При роботі зі світловим мікроскопом важко розпізнати різні компоненти клітин і тканин без диференціального фарбування. Метод фарбування вибирається відповідно до завдань дослідження, щоб виділити певні тканини або органели. Найпоширенішим методом забарвлення є забарвлення H & E (гематоксилін-еозин). Для якісного фарбування препарату потрібно використовувати якісні барвники, які надають рівномірне забарвлення і не потребують фільтрації (для зручності) (наприклад, Гематоксилін Джилла II Leica Surgipath GIll II Hematoxylin, 1 л / уп, Leica Biosystems і Еозин спиртової Leica Surgipath Eosin Y, 1 л / уп, Leica Biosystems).

Гематоксилін Джилла II Leica Surgipath GIll II Hematoxylin

Гематоксилін Джилла II Leica Surgipath GIll II Hematoxylin

Щоб зберегти вже пофарбований препарат, його покривають тонким шаром прозорої речовини, яка затвердіває і попереджує пошкодження препарату. Ця речовина має містити антиоксиданти, щоб попередити вицвітання забарвлення препарату і мати показник заломлення, аналогічний показнику заломлення скла, щоб запобігти спотворенню (наприклад, Середовище для укладення препаратів під скло Leica MicroMount, 473мл / уп, Leica Biosystems).

Середовище для укладення препаратів під скло Leica MicroMount

Середовище для укладення препаратів під скло Leica MicroMount

Роль в діагностиці патологій

Гістопатологія – це розділ гістології, який спеціалізується на мікроскопічної ідентифікації та дослідженні уражених тканин.

Гістологічне дослідження – це один з поширених способів діагностики патологічних станів. Результати дослідження надають інформацію про характер патології, її стан і в деяких випадках чутливість до певних методів лікування.

Сучасна діагностика дозволяє здійснювати гістологічне дослідження шкіри і внутрішніх органів, тим самим допомагаючи поставити точний діагноз, який допоможе зберегти життя пацієнта.

Будьте в курсі новин

    A