Аналіз на наркотичні речовини: методичні рекомендації щодо проведення токсикологічних досліджень

В першій частині статті ми розглянули методичні рекомендації щодо визначення алкоголю в крові (сечі) людини.  Сьогоднішній матеріал присвячений темі визначення наркотичних речовин.

Метод хромато-мас-спектрометрії (ГХ/МС)

Метод хромато-мас-спектрометрії (ХМС, ГХ-МС) заснований на поєднанні двох аналітичних методів: капілярної газової хроматографії – методу найбільш селективного по можливості поділу речовин та мас-спектрометрії – методу найбільш селективного та чутливого щодо детектування та структурної ідентифікації компонентів. Найбільш інформативні та надійні результати отримують у режимі повного сканування з реєстрацією мас-спектру. Використання режиму моніторингу вибраних іонів дозволяє підвищити чутливість визначення (на порядок величини), але знижує надійність ідентифікації. 

Метод призначений для отримання об’єктивних даних про наявність наркотичних, психоактивних речовин та їх метаболітів, які вказуються в діагностичних висновках, результатах медичного огляду, експертних висновках, результатах хіміко токсикологічного контролю та моніторингу.

Необхідні матеріали та обладнання:

• центрифуга лабораторна*
• модуль нагрівання та перемішування Reacti-Term*
• насос вакуумний 
• вортекс
• аналітичні ваги з точністю до 4-го знаку
• піпет-дозатори змінного об`єму 10-100 мкл, 100-1000 мкл, 1-10 мл, з відповідними наконечниками
• віали скляні 5мл 20х60мм з кришками
• віали пластикові центрифужні 15 мл з кришками
• віали скляні 2 мл з кришками та септами та мікровставки
• пляшки скляні для розчинів 250 мл, 500 мл, 1000 мл
• стакани мірні 100 мл, 250 мл
• мірний циліндр 100 мл
• підставка для 15 мл віал
• штатив для піпет-дозаторів

*Примітка: ємність такого обладнання, як наприклад центрифуга чи Reacti-Term обираються користувачем виходячи з бажаної кількості аналізів.

Необхідні реактиви:

Всі розчинники повинні бути максимально доступної чистоти!

• гідроксид натрію
• 0.1М соляна кислота
• сульфат натрію
• 10% розчин аміаку
• BSTFA для дериваизації
• дихлорметан
• етилацетат
• ізооктан
• ізопропанол
• метанол
• індикаторні смужки

Екстракція сечі для виявлення барбітуратів

1. 3 мл сечі підкислити насиченим розчином соляної кислоти до рН 2-3 (перевірити за        допомогою універсального індикатора — рожеве забарвлення).
2. Додати 3 мл дихлорметану та перемішати на вортексі 5 хв 900об/хв.
3. Суміш центрифугувати та відібрати нижній слой (центрифуга 4000об/хв 5 хв).
4. До екстракту додати зневоднений Na2SO4.
5. Сухий екстракт перенести у віалу та видалити розчинник випарюванням (50 оС баня).
6. Залишок розчинити в 100 мкл метанолу, перенести у віалу та інжектувати 1 мкл у прилад.

Екстракція сечі для виявлення бензодіазепінів, кокаїну, РСР та метадону

1. 3 мл сечі підлужити насиченим розчином аміаку 10% до рН 9-10 (перевірити за допомогою універсального індикатора — синьо-зелене забарвлення).
2. Додати 3 мл дихлорметану та перемішати на вортексі 5 хв 900об/хв.
3. Суміш центрифугувати та відібрати нижній слой (центрифуга 4000об/хв 5 хв).
4. До екстракту додати зневоднений Na2SO4.
5. Сухий екстракт перенести у віалу та видалити розчинник випарюванням (50 оС баня).
6. До залишку додати 70 мкл BSTFA та витримати при 70 оС впродовж 30хв. Перенести у віалу та 1 мкл ввести у прилад.

Екстракція сечі для виявлення фенілалкіламінів

1. 3 мл сечі підлужити насиченим розчином аміаку 10% до рН 9-10 (перевірити за допомогою універсального індикатора — синьо-зелене забарвлення).
2. Додати 3 мл дихлорметану та перемішати на вортексі 5 хв 900об/хв.
3. Суміш центрифугувати та відібрати нижній слой (центрифуга 4000об/хв 5 хв).
4. До екстракту додати зневоднений Na2SO4.
5. Сухий екстракт перенести у чашку для випарювання при кімнатній температурі.
6. До залишку додати 100 мкл метанолу, омити стінки чашки. Перенести у віалу та інжектувати 1 мкл у прилад.

Екстракція сечі для виявлення метаболіту ТГК (марихуана)

1. До 3 мл сечі додати 0,5 мл 10N розчину NaOH та витримати при 50 oС протягом 20хв.
2. Після охолодження довести рН до 2-3 розведеною соляною кислотою.
3. Додати 3 мл суміші ізооктан:етилацетат 7:1 та перемішати на вортексі 5хв 900об/хв.
4. Суміш центрифугують 4000об/хв 5хв.
5. Відбирають верхній слой  та додають зневоднений Na2SO4.
6. Сухий екстракт переносять у віалу  та випарюють розчинник досуха.(50С баня)
7. До залишку додати 70 мкл BSTFA та витримати при 70С протягом 30 хв. Переносять у віалу та вводять 1 мкл у прилад.

Екстракція сечі для виявлення опіатів

1. До 3 мл сечі додати 1,5 мл соляної кислоти до рН 1-2, закрити пробкою та витримати на бані при 90 оС 1 год.
2. Суміш охолодити, довести рН до 8-9 розчином аміаку.
3. Додати суміш розчинників метиленхлорид:ізопропанол (8:1) та екстрагувати 5 хв на вортексі 900об/хв.
4. Центрифугувати 4000 об/хв 5 хв.
5. Відбирають нижній слой.
6. Екстракт перенести у віалу та сушити за допомогою Na2SO4.
7. Сухий екстакт перенести у віалу та випарити розчинник (50С  на бані).
8. До залишку додати 70 мкл BSTFA та витримати 30 хв при 70С.
9. Перенести у віалу та ввести в прилад 1 мкл.

Умови хроматографування:

• температурна програма колонок: 100оС витримати 1 хв; зі швидкістю 35оС/хв до 300оС; витримати 15 хв
• температура інжектора: 250оС
• режим ділення потоку: 1:40
• потік газу носія: 1 мл/хв
• температура трансфер лайна: 250оС 
• температура джерела: 200оС
• діапазон мас m/z: 38-550 а.о.м.
• об’єм проби: 1 мкл

Нижче наведені приклади хроматограм

Рис.1. Хроматограма зразка з вмістом ТГК(марихуана).

Рис. 2. Хроматограма зразка з вмістом метадону.

Рис.3. Хроматограма зразка з вмістом амфетаміну.

Щоб інформація зажди була у вас під рукою, ми підготували методичні рекомендації в електронному форматі. 

Система газового хроматографа Trace 1610 з мас-детектором ISQ 7610 та парофазним автосамплером TriPlus 500

Лабораторна центрифуга

Вортекс

Вакуумний насос

Модуль нагріву та перемішування Reacti-Term

Ознайомитися з хроматографом TRACE 1610 можна тут