Анализ на наркотические вещества: методические рекомендации по проведению токсикологических исследований

В первой части статьи мы рассмотрели методические рекомендации по определению алкоголя в крови (мочи) человека. Сегодняшний материал посвящен теме определения наркотических веществ.

Метод хромато-масс-спектрометрии (ГХ/МС) 

Метод хромато-масс-спектрометрии (ХМС, ГХ-МС) основан на сочетании двух аналитических методов: капиллярной газовой хроматографии – метода наиболее селективного по возможности разделения веществ и масс-спектрометрии – метода наиболее селективного и чувствительного к детектированию и структурной идентификации компонентов. Наиболее информативные и надежные результаты получаются в режиме полного сканирования с регистрацией масс-спектра. Использование мониторинга выбранных ионов позволяет повысить чувствительность определения (на порядок величины), но снижает надежность идентификации.

Метод предназначен для получения объективных данных о наличии наркотических, психоактивных веществ и их метаболитов, указываемых в диагностических выводах, результатах медицинского осмотра, экспертных выводах, результатах химико токсикологического контроля и мониторинга.

Необходимые материалы и оборудование:

• центрифуга лабораторная*
• модуль нагревания и перемешивания Reacti-Term*
• насос вакуумный 
• вортекс
• аналитические весы с точностью до 4-го знака
• пипет-дозаторы сменного обьема 10-100 мкл, 100-1000 мкл, 1-10 мл, с соответствующими наконечниками
• виалы стеклянные 5мл 20х60мм с крышками
• виалы пластиковые центрифужные 15 мл с крышками
• виалы стеклянные 2 мл с крышками и септами и микровставки
• бутылки стеклянные для растворов 250 мл, 500 мл, 1000 мл
• стаканы мерные 100 мл, 250 мл
• мерный цилиндр 100 мл
• подставка для 15 мл виал
• штатив для пипет-дозаторов

*Примечание: емкостт такого оборудования, как например центрифуга или Reacti-Term, выбираются пользователем исходя из желаемого количества анализов.

Необходимые реактивы:

Все растворителя должны быть максимально доступной чистоты!

• гидроксид натрия
• 0.1М соляная кислота
• сульфат натрия
• 10% раствор амиака
• BSTFA для дериваизации
• дихлорметан
• этилацетат
• изооктан
• изопропанол
• метанол
• индикаторные полоски

Экстракция мочи для выявления барбитуратов

1. 3 мл мочи подкислить насыщенным раствором соляной кислоты до рН 2-3 (проверить с помощью универсального индикатора – розовую окраску).
2. Добавить 3 мл дихлорметана и перемешать на вортексе 5 мин 900 об/мин.
3. Смесь центрифугировать и отобрать нижний слой (центрифуга 4000 об/мин 5 мин).
4. К экстракту добавить обезвоженный Na2SO4.
5. Сухой экстракт перенести в виалу и удалить растворитель выпариванием (50 оС баня).
6. Остаток растворить в 100 мкл метанола, перенести в виал и инжектировать 1 мкл в прибор.

Экстракция мочи для выявления бензодиазепинов, кокаина, РСР и метадона

1. 3 мл мочи подлужить насыщенным раствором аммиака 10% до рН 9-10 (проверить с помощью универсального индикатора – сине-зеленую окраску).
2. Добавить 3 мл дихлорметана и перемешать на вортексе 5 мин 900 об/мин.
3. Смесь центрифугировать и отобрать нижний слой (центрифуга 4000 об/мин 5 мин).
4. К экстракту добавить обезвоженный Na2SO4.
5. Сухой экстракт перенести в виалу и удалить растворитель выпариванием (50 оС баня).
6. К остатку добавить 70 мкл BSTFA и выдержать при 70 °С в течение 30 мин. Перенести в виалу и 1 мкл ввести в прибор.

Экстракция мочи для выявления фенилалкиламинов

1. 3 мл мочи подлужить насыщенным раствором аммиака 10% до рН 9-10 (проверить с помощью универсального индикатора – сине-зеленую окраску).
2. Добавить 3 мл дихлорметана и перемешать на вортексе 5 мин 900 об/мин.
3. Смесь центрифугировать и отобрать нижний слой (центрифуга 4000об/мин 5 мин).
4. К экстракту добавить обезвоженный Na2SO4.
5. Сухой экстракт перенести в чашку для выпаривания при комнатной температуре.
6. К остатку добавить 100 мкл метанола, омыть стенки чашки. Перенести в виалу и инжектировать 1 мкл в прибор.

Экстракция мочи для выявления метаболита ТГК (марихуана)

1. К 3 мл мочи добавить 0,5 мл 10N раствора NaOH и выдержать при 50 oС в течение 20 мин.
2. После охлаждения довести рН до 2-3 разбавленной соляной кислоты.
3. Добавить 3 мл смеси изооктан:этилацетат 7:1 и перемешать на вортексе 5мин 900об/мин.
4. Смесь центрифугируют 4000об/мин 5мин.
5. Отбирают верхний слой и добавляют обезвоженный Na2SO4.
6. Сухой экстракт переносят в виалу и выпаривают растворитель досуха.(50С баня)
7. К остатку добавить 70 мкл BSTFA и выдержать при 70С в течение 30 мин. Переносят в виалу и вводят 1 мкл в прибор.

Экстракция мочи для выявления опиатов

1. К 3 мл мочи добавить 1,5 мл соляной кислоты до рН 1-2, закрыть пробкой и выдержать на бане при 90 °С 1 час.
2. Смесь охладить довести рН до 8-9 раствором аммиака.
3. Добавить смесь растворителей метиленхлорид:изопропанол (8:1) и экстрагировать 5 мин на вортексе 900об/мин.
4. Центрифугировать 4000 об/мин 5 мин.
5. Отбирают нижний слой.
6. Экстракт перенести в виал и сушить с помощью Na2SO4.
7. Сухой экстакт перенести в виалу и выпарить растворитель (50С на бане).
8. К остатку добавить 70 мкл BSTFA и выдержать 30 мин при 70С.
9. Перенести в виалу и ввести в прибор 1 мкл.

Условия хроматографирования:

• температурная програма колонок: 100оС выдержква 1 мин; со скоростью  35оС/мин до 300оС; выдержка  15 мин
• температура инжектора: 250оС
• режим деления потока: 1:40
• поток газа носителя: 1 мл/мин
• температура трансфер лайна: 250оС 
• температура источника: 200оС
• диапазон мас m/z: 38-550 а.о.м.
• обьем пробы: 1 мкл

Ниже приведены примеры хроматограмм

Рис.1. Хроматограмма образца с содержанием ТГК(марихуана).

Рис. 2. Хроматограмма образца с содержанием метадона.

Рис.3. Хроматограмма образца с содержанием амфетамина.

Для того, чтобы информация всегда была у вас под рукой, мы подготовили методические рекомендации в электронном формате.

Система газового хроматографа Trace 1610 з мас-детектором ISQ 7610 та парофазним автосамплером TriPlus 500

Лабораторна центрифуга

Вортекс

Вакуумний насос

Модуль нагріву та перемішування Reacti-Term

Ознакомиться с хроматографом TRACE 1610 можна здесь