Чотири поради щодо сканування гістологічних скелець

Дуже важливо мати добре підготовлену тканину – навіть найкращий сканер не зможе компенсувати погані зразки. Ось деякі аспекти підготовки, які можуть вплинути на процес сканування.

1. Розріз – цифрові патологічні сканери мають менший діапазон фокусування, ніж традиційні мікроскопи, тому майте це на увазі. При скануванні одноплощинних зображень найкращі результати дає стандартна товщина тканини (3 – 5 мкм). Для товстих зрізів може знадобитися багатоплощинне сканування (z-stack), але воно значно подовжує час сканування та розмір файлів.
2. Забарвлення – дуже слабке або надмірне забарвлення фону ускладнить автоматичну ідентифікацію тканини сканером і може призвести до збільшення ручної роботи.
3. Розташування – як і у випадку з традиційною мікроскопією, патологічні сканери найкраще працюють на рівних поверхнях тканин. Уникайте складок або зморшок на тканині для оптимального фокусування.
4. Покривне скло – якщо ви плануєте сканувати скельце, краще використовувати скляне покривне скло, оскільки пластикове може деформуватися з часом і вплинути на фокусування сканера. Як і при традиційній мікроскопії, переконайтеся, що під покривним склом немає бульбашок повітря, щоб запобігти скануванню ділянок, які не будуть у фокусі.

Щоб покращити результати, завжди перевіряйте та готуйте скельця перед скануванням.

1. Перевірте скельця на наявність ярликів, плівок або залишків пакувального матеріалу, які можуть вплинути на прилягання скельця до скануючого механізму і перешкоджати роботі сканера.
2. Обережно протріть скельця м’якою тканиною (наприклад, мікрофіброю), щоб видалити залишки пилу, плями води або відбитки пальців з верхньої та нижньої поверхні. Для очищення складних плям змочіть тканину водою або спиртовим розчином.
3. Перевірте, чи немає тріщин або сколів на предметному скельці, особливо на його кутах. Будь-які уламки скла можуть впасти під час сканування і пошкодити механізм сканування.
4. Зачекайте, поки скельця повністю висохнуть, перш ніж завантажувати їх у сканер, щоб уникнути потрапляння залишків середовища для заключення на механізм сканера.
5. Переконайтеся, що скельця розміщені рівно в стійці або тримачі сканера, а всі фіксуючі механізми задіяні. Якщо під час сканування скельце не лежить на одному рівні зі сканером, існує висока ймовірність того, що на сканованому зображенні будуть розфокусовані ділянки. Ярлики в нижній частині скельця можуть перешкоджати рівномірному скануванню, тому переконайтеся, що вони розміщені тільки на ділянці для маркування.

Кожна модель цифрового патологічного сканера має власний робочий процес і вимоги. Однак, є деякі загальні рекомендації, яких слід дотримуватися, щоб отримати якісне зображення.

1. Сканер повинен автоматично виявляти всі тканини на предметному склі, виключаючи несуттєві об’єкти, такі як ярлики, відбитки пальців або сторонні елементи. Слабке забарвлення тканини, надмірне забарвлення фону, знебарвлення монтажного носія або надмірна кількість дрібних уламків/слідів на слайдах – це все причини, які можуть призвести до поганого розпізнавання тканин. Якщо можливо, перевірте виявлення тканин на неоптимальних слайдах перед скануванням з високою роздільною здатністю, щоб уникнути необхідності повторного сканування пізніше.
2. Фокусування повинно бути автоматичним, а точки фокусування – якщо вони є – повинні бути рівномірно розподілені по тканині. Якщо деякі ділянки не скануються у фокусі, спробуйте розмістити додаткові точки фокусування вручну.
3. Уникайте розміщення точок фокусування на ділянках, де на покривному склі або під ним є пил, бульбашки повітря або інші дефекти. Це може призвести до того, що сканер сфокусується на неправильній площині сканування, що призведе до розфокусування тканини.

Незважаючи на всі ваші зусилля, не кожне сканування буде прийнятним з першого разу. Процеси контролю якості можуть відрізнятися в різних лабораторіях, але ви завжди маєте дотримуватися відповідних вимог, встановлених у вашій установі. Ось кілька кроків, які ви можете виконати для швидкого та ефективного контролю якості сканування у програмі для перегляду зображень.

1. Перегляньте все скельце – або, принаймні, всю відскановану ділянку тканини – при малому збільшенні (наприклад, 4x), перевіряючи наявність видимих розфокусованих ділянок або неспівпадінь. Невідповідність, як правило, видно у вигляді «лінії зшивання» через зображення, де перетинаються відскановані смуги, що складають повне зображення.
2. Збільшіть масштаб до того, при якому було отримано зображення з високою роздільною здатністю, і перегляньте його по одній горизонтальній траєкторії через ділянку тканини в найширшій точці. Це дозволить вам перевірити менші ділянки з поганим фокусуванням або ледь помітними зміщеннями.
3. Виконайте ідентичний огляд ділянки у вертикальному напрямку, від одного краю тканини до іншого по безперервній лінії, знову перевіряючи будь-які розфокусовані ділянки.
4. Точково перевірте кілька ділянок на слайді при великому збільшенні, особливо ті, де тканина має різну товщину або де є якісь дефекти. Саме ці області найчастіше мають поганий фокус.

Дотримуйтесь цих простих вказівок під час сканування, щоб створити високоякісні цифрові зображення і отримати постійний запис ваших скелець, який ви зможете переглядати, ділитися ним і аналізувати.