Четыре совета по сканированию гистологических стекол

Очень важно иметь хорошо подготовленную ткань – даже самый лучший сканер не сможет компенсировать плохие образцы. Вот некоторые аспекты подготовки, которые могут повлиять на процесс сканирования.

1. Разрез – цифровые патологические сканеры имеют меньший диапазон фокусировки, чем традиционные микроскопы, поэтому имейте это в виду. При сканировании одноплоскостных изображений лучшие результаты дает стандартная толщина ткани (3 – 5 мкм). Для толстых срезов может потребоваться многоплоскостное сканирование (z-stack), но оно значительно удлиняет время сканирования и размер файлов.
2. Окраска – слишком слабая или чрезмерная окраска фона затруднит автоматическую идентификацию ткани сканером и может привести к увеличению ручной работы.
3. Расположение – как и в случае с традиционной микроскопией, патологические сканеры лучше всего работают на ровных поверхностях тканей. Избегайте складок или морщин на ткани для оптимальной фокусировки.
4. Покрывное стекло – если вы планируете сканировать стеклышко, лучше использовать стеклянное покрывное стекло, поскольку пластиковое может деформироваться со временем и повлиять на фокусировку сканера. Как и при традиционной микроскопии, убедитесь, что под покрывным стеклом нет пузырьков воздуха, чтобы предотвратить сканирование участков, которые не будут в фокусе.

Чтобы улучшить результаты, всегда проверяйте и готовьте стекла перед сканированием.

1. Проверьте стекла на наличие ярлыков, пленок или остатков упаковочного материала, которые могут повлиять на прилегание стекла к сканирующему механизму и препятствовать работе сканера.
2. Осторожно протрите стекла мягкой тканью (например, микрофиброй), чтобы удалить остатки пыли, пятна воды или отпечатки пальцев с верхней и нижней поверхности. Для очистки сложных пятен смочите ткань водой или спиртовым раствором.
3. Проверьте, нет ли трещин или сколов на предметном стекле, особенно на его углах. Любые осколки стекла могут упасть во время сканирования и повредить механизм сканирования.
4. Подождите, пока стекла полностью высохнут, прежде чем загружать их в сканер, чтобы избежать попадания остатков среды для заключения на механизм сканера.
5. Убедитесь, что стекла размещены ровно в стойке или держателе сканера, а все фиксирующие механизмы задействованы. Если во время сканирования стеклышко не лежит на одном уровне со сканером, существует высокая вероятность того, что на сканируемом изображении будут расфокусированные участки. Ярлыки в нижней части стекла могут препятствовать равномерному сканированию, поэтому убедитесь, что они размещены только на участке для маркировки.

Каждая модель цифрового патологического сканера имеет собственный рабочий процесс и требования. Однако, есть некоторые общие рекомендации, которых следует придерживаться, чтобы получить качественное изображение.

1. Сканер должен автоматически обнаруживать все ткани на предметном стекле, исключая несущественные объекты, такие как ярлыки, отпечатки пальцев или посторонние элементы. Слабая окраска ткани, чрезмерная окраска фона, обесцвечивание монтажного носителя или чрезмерное количество мелких обломков/следов на слайдах – это все причины, которые могут привести к плохому распознаванию тканей. Если возможно, проверьте обнаружение тканей на неоптимальных слайдах перед сканированием с высоким разрешением, чтобы избежать необходимости повторного сканирования позже.
2. Фокусировка должна быть автоматической, а точки фокусировки – если они есть – должны быть равномерно распределены по ткани. Если некоторые участки не сканируются в фокусе, попробуйте разместить дополнительные точки фокусировки вручную.
3. Избегайте размещения точек фокусировки на участках, где на покрывном стекле или под ним есть пыль, пузырьки воздуха или другие дефекты. Это может привести к тому, что сканер сфокусируется на неправильной плоскости сканирования, что приведет к расфокусировке ткани.

Несмотря на все ваши усилия, не каждое сканирование будет приемлемым с первого раза. Процессы контроля качества могут отличаться в разных лабораториях, но вы всегда должны придерживаться соответствующих требований, установленных в вашем учреждении. Вот несколько шагов, которые вы можете выполнить для быстрого и эффективного контроля качества сканирования в программе для просмотра изображений.

1. Просмотрите все стеклышко – или, по крайней мере, всю отсканированную область ткани – при малом увеличении (например, 4x), проверяя наличие видимых расфокусированных участков или несовпадений. Несоответствие, как правило, видно в качестве «линии сшивания» через изображение, где пересекаются отсканированные полосы, составляющие полное изображение.
2. Увеличьте масштаб до того, при котором было получено изображение высокого разрешения, и просмотрите его по одной горизонтальной траектории через участок ткани в самой широкой точке. Это позволит вам проверить меньшие участки с плохой фокусировкой или едва заметными смещениями.
3. Выполните идентичный осмотр участка в вертикальном направлении, от одного края ткани к другому по непрерывной линии, снова проверяя любые расфокусированные участки.
4. Точечно проверьте несколько участков на слайде при большом увеличении, особенно те, где ткань имеет разную толщину или где есть какие-то дефекты. Именно эти области чаще всего имеют плохой фокус.

Следуйте этим простым указаниям во время сканирования, чтобы создать высококачественные цифровые изображения и получить непрерывную запись ваших стекол, которые вы сможете просматривать, делиться ими и анализировать.