Розділ 2. Сучасні вимоги до показників харчової безпеки: гармонізація законодавства України та ЄС

Мікотоксини – це токсичні вторинні метаболіти, що виробляються різними видами пліснявих грибів, які можуть вражати сільськогосподарські культури на етапах вирощування, збору врожаю, транспортування та зберігання. Їх наявність у харчових продуктах та кормах становить серйозну загрозу для здоров’я людей та тварин, спричиняючи гострі та хронічні захворювання, включаючи канцерогенні, імунотоксичні, нефротоксичні та гепатотоксичні ефекти. За даними системи швидкого оповіщення для харчових продуктів та кормів ЄС (RASFF), мікотоксини посідають одне з провідних місць за кількістю нотифікацій про невідповідність, причому афлатоксини є найбільш проблемною групою, на яку припадає значна частка виявлених перевищень. Неможливо повністю запобігти утворенню мікотоксинів, тому їх контроль у сировині та готовій продукції є критично важливим завданням.

В Європейському Союзі максимальні рівні для основних мікотоксинів (афлатоксини B1, B2, G1, G2 та M1; охратоксин А; патулін; дезоксиніваленол; зеараленон; фумонізини B1 та B2) у різних харчових продуктах встановлені Регламентом (ЄС) 2023/915. Цей регламент замінив попередній Регламент (ЄС) № 1881/2006, з яким було гармонізовано українське законодавство (Наказ МОЗ №368 зі змінами №1238). Новий регламент ЄС вніс певні зміни: наприклад, для охратоксину А було розширено перелік контрольованих продуктів (сухофрукти, фісташки, сухі сніданки, соняшникове насіння) та знижено ліміти для деяких позицій. Також було розширено перелік продуктів, в яких контролюються Т-2 та НТ-2 токсини, та встановлено для них досить низькі ГДК (10-100 мкг/кг).

В Україні, окрім згаданого Наказу МОЗ №368, у 2024 році було прийнято новий Наказ про затвердження методів відбору зразків та лабораторних досліджень для визначення рівнів мікотоксинів. Цей документ встановлює не лише процедури відбору проб, але й важливі критерії для аналітичних методів, зокрема вимоги до меж кількісного визначення (LOQ). Для певних мікотоксинів LOQ встановлені фіксовано, а для інших розраховуються за формулою: ≤ 0,5 * ГДК і бажано бути нижчим (≤ 0,2 *ГДК). Для суми мікотоксинів LOQ (індивідуальний)  ≤ 0,5 * ГДК/n, де n є кількістю токсинів, включених до визначення ГДК.

Для визначення мікотоксинів можуть використовуватися як біоаналітичні методи (наприклад, ІФА), так і хроматографічні. Основними інструментальними методами є високоефективна рідинна хроматографія (ВЕРХ) з різними типами детектування (найчастіше флуоресцентним – FLD) та рідинна хроматографія, поєднана з тандемною мас-спектрометрією (РХ-МС/МС).

• ВЕРХ-ФЛД: часто використовується для аналізу афлатоксинів (B1, B2, G1, G2) та охратоксину А. Ці методи, як правило, є моно- або двокомпонентними і для досягнення необхідної чутливості вимагають ретельної пробопідготовки, зокрема використання імуноафінних колонок для очищення та концентрування.
• РХ-МС/МС: є золотим стандартом для мультикомпонентного аналізу мікотоксинів, дозволяючи одночасно визначати велику кількість сполук. Існує низка стандартизованих методів:

• ДСТУ EN 17279:2022 (EN 17279:2019) : мультиметод для скринінгу афлатоксину В1, дезоксиніваленолу, фумонізинів В1 та В2, охратоксину А, НТ-2, Т-2 токсинів та зеараленону. Чутливість цього методу для деяких аналітів, наприклад, афлатоксину В1 (LOQ близько 2 мкг/кг), може бути на межі допустимих рівнів для певних продуктів, особливо для дитячого харчування.
• ДСТУ EN 17280 (EN 17280:2017) : мультиметод РХ-МС/МС для визначення Т-2 токсину, НТ-2 токсину, ніваленолу та дезоксиніваленолу в зернових та продуктах їх переробки. Цей метод не включає афлатоксини та охратоксин А. У 2022 році було розроблено новий європейський метод EN 17641:2022, який включає ширший перелік мікотоксинів, включаючи всі ключові афлатоксини, та має значно вищу чутливість завдяки використанню імуноафінної очистки для афлатоксинів перед РХ-МС/МС аналізом.

1. Вартість імуноафінної очистки: для ВЕРХ-ФЛД методів та деяких високочутливих РХ-МС/МС методів використання одноразових імуноафінних колонок значно здорожчує аналіз, особливо при великій кількості зразків.
2. Чутливість мультиметодів: хоча РХ-МС/МС мультиметоди з простішою пробопідготовкою (наприклад, QuEChERS або “розбав та вколюй”) є економічно привабливішими, їх чутливість може бути недостатньою для контролю дуже низьких ГДК, особливо в складних матрицях або для дитячого харчування.
3. Відсутність стандартизованих ВЕРХ методів: для деяких важливих мікотоксинів, таких як Т-2 та НТ-2 токсини, не існує стандартизованих методів на основі ВЕРХ, що робить РХ-МС/МС єдиним прийнятним варіантом.
4. Матричні ефекти: у РХ-МС/МС аналізі матричні ефекти (посилення або пригнічення іонізації цільових аналітів компонентами матриці) можуть суттєво впливати на точність кількісного визначення та вимагають ретельної валідації методу та використання підходів для їх компенсації (наприклад, матрично-калібрувальні стандарти, ізотопно-мічені внутрішні стандарти).

Компанія Thermo Scientific пропонує комплексні рішення для аналізу мікотоксинів, що відповідають найсучаснішим вимогам та допомагають подолати аналітичні виклики.

• ВЕРХ високого тиску (UHPLC) для афлатоксинів: системи Thermo Scientific Vanquish UHPLC у поєднанні з флуоресцентними детекторами дозволяють проводити швидкий (аналіз за 4 хвилини) та високочутливий (LOD до 0.075 мкг/кг для деяких афлатоксинів) аналіз без необхідності постколонкової дериватизації. Це досягається завдяки оптимізованій конструкції проточних комірок детекторів, що посилюють власний сигнал флуоресценції афлатоксинів B1 та G1.

Ключова перевага: Значне скорочення часу аналізу, висока чутливість, що перевищує регуляторні вимоги, та економія на реактивах для дериватизації.

• РХ-МС/МС системи (наприклад, TSQ Altis Plus, TSQ Quantis Plus): Thermo Scientific розробила та валідувала методики для одночасного визначення широкого спектру мікотоксинів (15-17 мікотоксинів) з використанням простої пробопідготовки або QuEChERS, що не вимагає дорогих імуноафінних колонок. Екстракція проводиться, наприклад, ацетонітрилом, після чого екстракт центрифугується та вколюється в систему. Тривалість такого аналізу становить близько 12-15 хвилин для хроматографічного розділення. Чутливість таких методів, навіть при використанні не найчутливіших моделей трьохквадрупольних мас-спектрометрів, є достатньою для відповідності європейським вимогам для більшості продуктів. Для особливо складних завдань, таких як аналіз дитячого харчування з наднизькими ГДК, використання більш чутливих детекторів серії TSQ забезпечує необхідні межі кількісного визначення.

 Ключова перевага: Мультианаліз десятків сполук, проста та швидка пробопідготовка, що значно знижує вартість одного аналізу та підвищує продуктивність лабораторії. Готові, валідовані методики “під ключ” (Explorer kits) спрощують впровадження та гарантують надійність результатів.

Інвестиція в РХ-МС/МС для аналізу мікотоксинів є стратегічно виправданою. Це пов’язано не лише з поточними регуляторними вимогами, але й з чіткою тенденцією до розширення переліку контрольованих мікотоксинів та подальшого зниження їх ГДК у майбутньому. Регламент (ЄС) 2023/915 вже продемонстрував цей тренд. Токсини, такі як стеригматоцистин, деякі фузарієві токсини (крім вже регульованих), а також токсини грибів роду Alternaria, вже знаходяться в полі зору регуляторів, частково контролюються або рекомендовані для моніторингу. Класичні ВЕРХ-ФЛД методи, будучи переважно моно- або двокомпонентними та вимагаючи дорогої імуноафінної очистки для кожного аналізу або невеликої групи аналітів, стають все менш ефективними для комплексного скринінгу. Натомість, РХ-МС/МС системи, особливо трьохквадрупольні мас-спектрометри Thermo Scientific, пропонують високу гнучкість, дозволяючи легко додавати нові аналіти до існуючих мультиметодів без значних апаратних змін. Таким чином, лабораторія, що інвестує в сучасне РХ-МС/МС обладнання сьогодні, забезпечує собі готовність до майбутніх регуляторних викликів, мінімізуючи потребу в додаткових інвестиціях та кардинальній перебудові аналітичних підходів у найближчі роки. Це гарантує довгострокову рентабельність та стабільну відповідність нормам.

Таблиця 1: Мікотоксини – регуляторні ліміти в ЄС (Регламент 2023/915) та Україні; стандартизовані методи та рекомендовані рішення Thermo Scientific.

Читайте продовження: Ключові класи контамінантів. Пестициди.