Раздел 2. Современные требования к показателям пищевой безопасности: гармонизация законодательства Украины и ЕС

Микотоксины – это токсичные вторичные метаболиты, вырабатываемые различными видами плесневых грибов, которые могут поражать сельскохозяйственные культуры на этапах выращивания, сбора урожая, транспортировки и хранения. Их наличие в пищевых продуктах и кормах представляет серьезную угрозу для здоровья людей и животных, вызывая острые и хронические заболевания, включая канцерогенные, иммунотоксические, нефротоксические и гепатотоксические эффекты. По данным системы быстрого оповещения для пищевых продуктов и кормов ЕС (RASFF), микотоксины занимают одно из ведущих мест по количеству нотификаций о несоответствии, причем афлатоксины являются наиболее проблемной группой, на которую приходится значительная доля выявленных превышений. Невозможно полностью предотвратить образование микотоксинов, поэтому их контроль в сырье и готовой продукции является критически важной задачей.

В Европейском Союзе максимальные уровни для основных микотоксинов (афлатоксины B1, B2, G1, G2 и M1; охратоксин А; патулин; дезоксиниваленол; зеараленон; фумонизины B1 и B2) в различных пищевых продуктах установлены Регламентом (ЕС) 2023/915. Этот регламент заменил предыдущий Регламент (ЕС) № 1881/2006, с которым было гармонизировано украинское законодательство (Приказ МЗ №368 с изменениями №1238). Новый регламент ЕС внес определенные изменения: например, для охратоксина А был расширен перечень контролируемых продуктов (сухофрукты, фисташки, сухие завтраки, семена подсолнечника) и снижены лимиты для некоторых позиций. Также был расширен перечень продуктов, в которых контролируются Т-2 и НТ-2 токсины, и установлены для них достаточно низкие ПДК (10-100 мкг/кг).

В Украине, кроме упомянутого Приказа МЗ №368, в 2024 году был принят новый Приказ об утверждении методов отбора проб и лабораторных исследований для определения уровней микотоксинов. Этот документ устанавливает не только процедуры отбора проб, но и важные критерии для аналитических методов, в частности требования к пределам количественного определения (LOQ). Для определенных микотоксинов LOQ установлены фиксированно, а для других рассчитываются по формуле: ≤ 0,5 * ПДК и желательно быть ниже (≤ 0,2 * ПДК). Для суммы микотоксинов LOQ (индивидуальный) ≤ 0,5 * ПДК/n, где n — количество токсинов, включенных в определение ПДК.

Для определения микотоксинов могут использоваться как биоаналитические методы (например, ИФА), так и хроматографические. Основными инструментальными методами являются высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) с различными типами детектирования (чаще всего флуоресцентным – FLD) и жидкостная хроматография, совмещенная с тандемной мас-спектрометрией (ЖХ-МС/МС).

• ВЭЖХ-ФЛД: Часто используется для анализа афлатоксинов (B1, B2, G1, G2) и охратоксина А. Эти методы, как правило, являются моно- или двухкомпонентными и для достижения необходимой чувствительности требуют тщательной пробоподготовки, в частности использования иммуноаффинных колонок для очистки и концентрирования.
• ЖХ-МС/МС: Является золотым стандартом для мультикомпонентного анализа микотоксинов, позволяя одновременно определять большое количество соединений. Существует ряд стандартизированных методов:
• ДСТУ EN 17279:2022 (EN 17279:2019) : мультиметод для скрининга афлатоксина В1, дезоксиниваленола, фумонизинов В1 и В2, охратоксина А, НТ-2, Т-2 токсинов и зеараленона. Чувствительность этого метода для некоторых аналитов, например, афлатоксина В1 (LOQ около 2 мкг/кг), может быть на границе допустимых уровней для определенных продуктов, особенно для детского питания.
• ДСТУ EN 17280 (EN 17280:2017) : мультиметод РХ-МС/МС для определения Т-2 токсина, НТ-2 токсина, ниваленола и дезоксиниваленола в зерновых и продуктах их переработки. Этот метод не включает афлатоксины и охратоксин А.

В 2022 году был разработан новый европейский метод EN 17641:2022, который включает более широкий перечень микотоксинов, включая все ключевые афлатоксины, и имеет значительно более высокую чувствительность благодаря использованию иммуноаффинной очистки для афлатоксинов перед РХ-МС/МС анализом.

1. Стоимость иммуноаффинной очистки: для ВЕРХ-ФЛД методов и некоторых высокочувствительных ЖХ-МС/МС методов использование одноразовых иммуноаффинных колонок значительно удорожает анализ, особенно при большом количестве образцов.
2. Чувствительность мультиметодов: хотя ЖХ-МС/МС мультиметоды с более простой пробоподготовкой (например, QuEChERS или «разбавь и вколи») являются экономически более привлекательными, их чувствительность может быть недостаточной для контроля очень низких ПДК, особенно в сложных матрицах или для детского питания.
3. Отсутствие стандартизированных ВЭЖХ методов: для некоторых важных микотоксинов, таких как Т-2 и НТ-2 токсины, не существует стандартизированных методов на основе ВЭЖХ, что делает ЖХ-МС/МС единственным приемлемым вариантом.
4. Матричные эффекты: в ЖХ-МС/МС анализе матричные эффекты (усиление или подавление ионизации целевых аналитов компонентами матрицы) могут существенно влиять на точность количественного определения и требуют тщательной валидации метода и использования подходов для их компенсации (например, матрично-калибровочные стандарты, изотопно-меченые внутренние стандарты).

Компания Thermo Scientific предлагает комплексные решения для анализа микотоксинов, которые соответствуют самым современным требованиям и помогают преодолеть аналитические вызовы.

• ВЭЖХ высокого давления  (UHPLC) для афлатоксинов: Системы Thermo Scientific Vanquish UHPLC в сочетании с флуоресцентными детекторами позволяют проводить быстрый (анализ за 4 минуты) и высокочувствительный (LOD до 0,075 мкг/кг для некоторых афлатоксинов) анализ без необходимости постколоночной дериватизации. Это достигается благодаря оптимизированной конструкции проточных ячеек детекторов, усиливающих собственный сигнал флуоресценции афлатоксинов B1 и G1.

Ключевое преимущество: Значительное сокращение времени анализа, высокая чувствительность, превышающая нормативные требования, и экономия на реактивах для дериватизации.

• ЖХ-МС/МС системы (например, TSQ Altis Plus, TSQ Quantis Plus): Thermo Scientific разработала и валидировала методики для одновременного определения широкого спектра микотоксинов (15-17 микотоксинов) с использованием простой пробоподготовки или QuEChERS, не требующей дорогостоящих иммуноаффинных колонок. Экстракция проводится, например, ацетонитрилом, после чего экстракт центрифугируется и вводится в систему. Продолжительность такого анализа составляет около 12-15 минут для хроматографического разделения. Чувствительность таких методов, даже при использовании не самых чувствительных моделей трехквадрупольных масс-спектрометров, является достаточной для соответствия европейским требованиям для большинства продуктов. Для особо сложных задач, таких как анализ детского питания со сверхнизкими ПДК, использование более чувствительных детекторов серии TSQ обеспечивает необходимые пределы количественного определения.

Ключевое преимущество: Мультианализ десятков соединений, простая и быстрая пробоподготовка, что значительно снижает стоимость одного анализа и повышает производительность лаборатории. Готовые, валидированные методики «под ключ» (Explorer kits) упрощают внедрение и гарантируют надежность результатов.

Инвестиции в РХ-МС/МС для анализа микотоксинов являются стратегически оправданными. Это связано не только с текущими нормативными требованиями, но и с четкой тенденцией к расширению перечня контролируемых микотоксинов и дальнейшему снижению их ПДК в будущем. Регламент (ЕС) 2023/915 уже продемонстрировал этот тренд. Токсины, такие как стеригматоцистин, некоторые фузариевые токсины (кроме уже регулируемых), а также токсины грибов рода Alternaria, уже находятся в поле зрения регуляторов, частично контролируются или рекомендованы для мониторинга. Классические ВЕРХ-ФЛД методы, будучи преимущественно моно- или двухкомпонентными и требуя дорогостоящей иммуноаффинной очистки для каждого анализа или небольшой группы аналитов, становятся все менее эффективными для комплексного скрининга. Вместо этого, РХ-МС/МС системы, особенно трехквадрупольные масс-спектрометры Thermo Scientific, предлагают высокую гибкость, позволяя легко добавлять новые аналиты к существующим мультиметодам без значительных аппаратных изменений. Таким образом, лаборатория, инвестирующая в современное РХ-МС/МС оборудование сегодня, обеспечивает себе готовность к будущим регуляторным вызовам, минимизируя потребность в дополнительных инвестициях и кардинальной перестройке аналитических подходов в ближайшие годы. Это гарантирует долгосрочную рентабельность и стабильное соответствие нормам.

Таблица 1: Микотоксины – регуляторные лимиты в ЕС (Регламент 2023/915) и Украине, стандартизированные методы и рекомендуемые решения Thermo Scientific.

Читайте продолжение: Ключевые классы контаминантов. Пестициды.