Ампліфікатори або термоциклери – це спеціальне обладнання для ампліфікації (збільшення числа копій фрагментів ДНК, використовуючи метод полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР)). Термоциклери забезпечують циклічне нагрівання/охолодження протягом заданого часу та температурних показників.
ПЛР дозволяє синтезувати в пробірці (in vitro) безмежну кількість копій певного фрагмента ДНК з вихідного зразка (використовуючи його як матрицю), тим самим, підвищуючи концентрацію фрагменту у зразку в середньому в 106-109 разів. Для збільшення кількості ДНК потрібно проведення певної кількості циклів реакції, що повторюються (зазвичай 20 – 40 разів), в ході кожного з яких кількість молекул-копій збільшується в геометричній прогресії.
Метод ПЛР складається з 3 основних етапів:
...Денатурація – руйнування водневих зв’язків та перетворення дволанцюгової молекули на дві одноланцюгові, температура 94 – 98 °С.
- Приєднання (відпал) праймерів, температура 40-75 °С. Праймери – спеціально підібрані короткі фрагменти ДНК, що комплементарні певним ділянкам ДНК-матриці, з яких починається новий синтез.
- Елонгація ДНК – синтез нового ланцюга ДНК, температура 60–75 °С.
Залежно від способу подальшої детекції накопиченої ДНК виділяють такі типи ампліфікаторів:
- Ампліфікатори для детекції по кінцевій точці (класичні термоциклери).
- Ампліфікатори з детекцією накопичення ДНК у режимі реального часу.
- Ампліфікатори цифрові чи системи для цифрової краплинної ПЛР.
Докладніше
Менше
