Обработка тканей. Для чего нужны спирт, ксилол и парафин

Обработка тканей – это процедура удаления воды из тканей и замена ее средой, которая затвердевает и позволяет производить тонкие срезы на микротоме.

Перед обработкой ткань должна быть как следует изъята и зафиксирована, и только затем она проходит через процесс, включающий следующие шаги:

• Дегидратация
• Очистка
• Инфильтрация

После обработки образцы заливают парафином, создавая таким образом парафиновые блоки. Когда блоки разделены, они могут архивироваться, что позволяет использовать их позже.

«Обработка ткани» – это шаги, необходимые для перевода образца от фиксации в состояние полной инфильтрации в гистологическом исследовании. Впоследствии обработанная ткань превращается в парафиновый блок, из которого можно приготовить срезы на микротоме.

Шаг 1: Дегидратация

Дегидратация

Дегидратация – это процесс удаления воды из ткани. На этом этапе спирт быстро проникает в ткани и вода заменяется спиртом. Поскольку спирты действуют быстро и могут уменьшаться и делать твердую ткань, необходимо быть осторожным при расчете времени, необходимого для этапа обезвоживания.

Этот процесс осуществляется путём погружения образцов в серию спиртов. Спирт постепенно заменяет воду во всех клетках образца. Используется серия возрастающих (обычно от 70% до 100%) концентраций спирта во избежание чрезмерного искажения ткани.

Если дегидратация неполная, очиститель (растворитель) не будет действовать должным образом и в результате образуются мягкие, кашеобразные блоки. Неполное обезвоживание является причиной большинства проблем дальнейшей обработки.

Шаг 2: Очистка

Очистка

Поскольку большинство спиртов (за исключением изопропилового спирта) и парафин не смешиваются, вводится следующий этап, известный как очистка.

Необходимо использовать промежуточный растворитель, полностью смешивающийся с обоими (например, ксилол). Этот растворитель вытесняет спирт в ткани в процессе очищения. Другой важной ролью очистительного агента является удаление значительного количества липидов из ткани, которое в противном случае представляет барьер для парафиновой инфильтрации. Чтобы убедиться, что все следы спирта удалены из обрабатываемых тканей, требуется многократная очистка.

Но следует помнить, что длительное пребывание в очищающих средствах приведет к образованию твердых, хрупких тканей.

Читайте также: реагенты для гистологии

Ксилол Leica Biosystems применяется во многих лабораториях мира. В частности это ксилол гистологический Leica Surgipath Xylenes – высокоочищенная смесь, используемая при проведении гистологических и цитологических исследований.

Шаг 3: Инфильтрация

Инфильтрация

Теперь образец можно пропитать парафином. Расплавленный парафин проникает в ткани и при охлаждении затвердевает до консистенции, позволяющей производить срезы на микротоме. Уровень структурной поддержки, оказываемой твердым парафином, можно регулировать путем выбора различных парафиновых составов (т.е. инфильтрирующий тип против универсального типа). Эта среда содержит клетки и межклеточные структуры в надлежащем соотношении при разрезании на тонкие части.

Необходимо многократное изменение гистологического парафина для полного вытеснения очистителя. Инфильтрация парафина существенно усиливается вакуумом.

Общий список реагентов реагентов для обработки ткани

Общий список реагентов реагентов для обработки ткани

У нас вы всегда можете купить ксилол, растворы для декальцинации, парафины и другие расходные материалы гистологии от производителя Leica Biosystems. Список продукции можно посмотреть по ссылке.

Антон Загурдаєв

Провідний спеціаліст департаменту мікроскопії та лабораторного обладнання

Спеціалізація: рішення для мікроскопії та гістопатології.