Окрашивание гематоксилином является наиболее часто используемым рутинным процессом, выполняемым в гистологической лаборатории. Кроме того, протоколы окрашивания на основе гематоксилина считаются одними из старейших в лаборатории, поскольку некоторые рецептуры растворов датируются более чем столетней историей.
Ценность гематоксилина заключается в способности растворов алюминиевого гематоксилина окрашивать хроматин в ядрах клеток. И хотя недавние достижения в области клеточной биологии и молекулярной патологии привели к значительным улучшениям в практике диагностики патологий, именно изменения в структуре хроматина вместе с изменениями размеров и формы ядер, выявляемые при окрашивании гематоксилином, остаются ключевыми диагностическими маркерами при оценке патологических состояний.
Гематоксилин
Несмотря на важность и актуальность гематоксилина в диагностической патологии, химия гематоксилина остается малоизученной.
Окисление и образование гематеина
Гематоксилин — это натуральный продукт, получаемый из сердцевины кампешевого дерева (Haematoxylum campechianum). Гематоксилин относительно бесцветен и без дополнительных модификаций практически не имеет ценности в качестве биологического красителя. Использование слова «гематоксилин» для описания окрашивающего раствора несколько вводит в заблуждение, но по-прежнему используется для удобства.
Для получения функционального красителя гематоксилин окисляют до гематеина, а затем связывают с одним из нескольких ионов металлов, включая алюминий (Al+3), железо (Fe+3) и хром (Cr+3). Ион металла, связанный с красителем, который участвует в связывании красителя с тканью, называется протравой.
Превратить гематоксилин в гематеин можно с помощью действия ряда агентов. Несколько ранее используемых составов, таких как Делафилд и Эрлих, полагаются на атмосферный кислород для окисления. В этих составах гематоксилин и соли алюминия хранятся в бутылках с неплотно закрытыми или ватными пробками для облегчения окисления. Также для ускорения окисления использовался процесс барботирования воздуха через растворы гематоксилина. Из-за длительного периода времени (4-10 недель), необходимого для «естественного созревания» или окисления гематоксилина в этих условиях, эти процедуры сегодня редко используются. В настоящее время большинство составов включают химический окислитель, такой как йодат натрия, который быстро превращает гематоксилин в гематеин. Концентрации йодата натрия основаны на количестве гематоксилина и обычно находятся в диапазоне от 0,10 до 0,20 граммов йодата натрия на грамм гематоксилина. Оксид ртути использовался в качестве предпочтительного окислителя в формациях Харрис в течение многих лет, но больше не используется из-за экологических проблем, связанных с ртутью. Сегодня оксид ртути заменен йодатом натрия в модифицированных препаратах Харриса.
В отличие от гематоксилина, структура которого хорошо охарактеризована, в последние годы обсуждается молекулярная структура гематеина. Традиционная структура гематеина, которая включает хиноидное кольцо, изображена на рисунке ниже. Независимо от точной структуры гематеина, мы можем предположить, что он структурно подобен гематоксилину на основании ЯМР-анализа и сходства молекулярной массы. Изменение структуры приводит к превращению относительно бесцветного гематоксилина в красновато-коричневый гематеин. Кроме того, окисление до гематеина необходимо для связывания ионов металлов, таких как алюминий.
Окисление гематоксилина
Окрашивание срезов
Гематоксилин как краситель используется для:
- обзорных целей: получить представление о структуре ткани или органа
- специальных целей: обнаружить определенные элементы клетки или ткани (митохондрии, эластические волокна соединительной ткани и т. д.).
Существует несколько способов приготовления растворов гематоксилина в зависимости от целей исследований.
Наиболее распространенным в гистологии является метод окрашивания гематоксилин-эозином. Данный метод широко используется в медицине, в частности при биопсии ткани.
Купить гематоксилин
Компания Leica Biosystems производит несколько вариантов гематоксилина. К примеру.
Гематоксилин Novocastra, RE7107. Предназначен для использования в процедурах иммуногистохимического (ИHC) окрашивания.
Гематоксилін Novocastra
Гематоксилин Гарриса (Harris Hematoxylin). Обычно используется в регрессивных методах, но также может применяться в цитологии и гистологии.
Гематоксилин Гарриса
Гематоксилин Surgipath I, II, III. Gill I обычно рекомендуется для цитологии. Более сильный Gill III предпочтительнее для использования в гистологии. GIll II представляет собой гематоксилин средней силы.
Гематоксилин Surgipath
Это далеко не полный перечень продукции, которую предлагает немецкий производитель. Имеются различные варианты красителя (растворы, порошки), а также различная фасовка, поэтому у нас вы сможете купить гематоксилин в том виде и объеме, который необходим именно под ваши задачи.