Фарбування гематоксиліном є рутинним процесом, що найбільш часто виконується в гістологічній лабораторії. Крім того, протоколи фарбування на основі гематоксиліну вважаються одними з найстаріших, оскільки деякі рецептури розчинів датуються більш ніж столітньою історією.
Цінність гематоксиліну полягає у здатності розчинів алюмінієвого гематоксиліну забарвлювати хроматин у ядрах клітин. І хоча нещодавні досягнення в галузі клітинної біології та молекулярної патології призвели до значних поліпшень у практиці діагностики патологій, саме зміни у структурі хроматину разом із змінами розмірів та форми ядер, що виявляються при фарбуванні гематоксиліном, залишаються ключовими діагностичними маркерами при оцінці патологічних станів.
Гематоксилін
Незважаючи на важливість та актуальність гематоксиліну в діагностичній патології, хімія гематоксиліну залишається маловивченою.
Окислення та утворення гематеїну
Гематоксилін – це натуральний продукт, що отримується з серцевини кампешевого дерева (Haematoxylum campechianum). Гематоксилін відносно безбарвний, і без додаткових модифікацій практично не має цінності як біологічний барвник. Використання слова «гематоксилін» для опису розчину, що фарбує, дещо вводить в оману, але як і раніше використовується для зручності.
Для отримання функціонального барвника гематоксилін окислюють до гематеїну, а потім пов’язують з одним із декількох іонів металів, включаючи алюміній (Al+3), залізо (Fe+3) та хром (Cr+3). Іон металу, пов’язаний із барвником, який бере участь у зв’язуванні барвника з тканиною, називається протравою.
Перетворити гематоксилін на гематеїн можна за допомогою дії ряду агентів. Раніше використовувалися такі суміші, як Делафілд та Ерліх, що покладаються на атмосферний кисень для окислення. У цих складах гематоксилін та солі алюмінію зберігаються у пляшках з нещільно закритими або ватними пробками для полегшення окислення. Також для прискорення окиснення використовувався процес барботування повітря через розчини гематоксиліну. Через тривалий період (4-10 тижнів), необхідний для «природного дозрівання» або окислення гематоксиліну в цих умовах, ці процедури сьогодні рідко використовуються. На сьогодні більшість сумішей включають хімічний окислювач, такий як йодат натрію, який швидко перетворює гематоксилін на гематеїн. Концентрації йодату натрію засновані на кількості гематоксиліну і зазвичай знаходяться в діапазоні від 0,10 до 0,20 грам йодату натрію на грам гематоксиліну. Оксид ртуті використовувався як найкращий окислювач у формаціях Харріса протягом багатьох років, але більше не використовується через екологічні проблеми, пов’язані з ртуттю. Сьогодні оксид ртуті замінений йодатом натрію у модифікації Харріса.
На відміну від гематоксиліну, структура якого добре охарактеризована, останніми роками обговорюється молекулярна структура гематеїну. Традиційна структура гематеїну, яка включає хіноїдне кільце, зображена на малюнку нижче. Незалежно від точної структури гематеїну, ми можемо припустити, що він структурно подібний до гематоксиліну (на підставі ЯМР-аналізу та подібності молекулярної маси). Зміна структури призводить до перетворення відносно безбарвного гематоксиліну на червонувато-коричневий гематеїн. Крім того, окислення гематеїну необхідне для зв’язування іонів металів, таких як алюміній.
Окислення гематоксиліну
Фарбування зрізів
Гематоксилін як барвник використовується для:
- оглядових цілей: отримати уявлення про структуру тканини
- спеціальних цілей: виявити певні елементи клітини або тканини (мітохондрії, еластичні волокна сполучної тканини тощо).
Існує кілька способів приготування розчинів гематоксиліну залежно від мети досліджень.
Найбільш поширеним у гістології є метод фарбування гематоксилін-еозином. Цей метод широко використовується в медицині, зокрема при біопсії тканини.
Купити гематоксилін
Компанія Leica Biosystems виготовляє декілька варіантів гематоксиліну.
Гематоксилін Гарріса (Harris Hematoxylin). Зазвичай використовується в регресивних методах, але також може використовуватися в цитології та гістології.
Harris Hematoxylin
*Гематоксилін Гарріса не містить ртуті
Гематоксилін Surgipath Gill I, II, III. зазвичай рекомендується для цитології та гістологічних досліджень. Більш сильний Gill III переважно використовується в гістології. GIll II є гематоксиліном середньої сили.
Гематоксилін Surgipath
Гематоксилін Novocastra, RE7107. Призначений для використання у процедурах імуногістохімічного (ІHC) фарбування.
Гематоксилін Novocastra
Це далеко не повний перелік продукції, яку пропонує німецький виробник. Барвники представленні в різних варіантах (розчини, порошки) та в різному фасуванні, тому у нас ви зможете купити гематоксилін у тому вигляді та об’ємі, який необхідний саме під ваші завдання.
