Реагенты для SSP-типирования от One Lambda Inc

Реагенты Micro SSP™ – это линия тестов для HLA-типирования с использованием специфических праймеров (SSP), включающая тесты низкого разрешения (Generic), тесты высокого разрешения (High Resolution), аллель-специфичные тесты (Allele Specific), тесты для определения одной аллели (Singles) и тесты для прояснения неоднозначных результатов серологического типирования (Seramates).

Преимущества технологии Micro SSP^® от компании One Lambda

• получение результата типирования менее, чем за 2 часа;

• генотипирование с высоким и низким разрешением;

• широкий спектр определяемых аллелей (полный список см. ниже);

• праймеры уже внесены в лунки планшета;

• все реагенты набора готовы к использованию;

• внутренний контроль в каждой лунке планшета;

• минимальный расход гелей.

Содержание наборов Micro SSP^®

Наборы Micro SSP^® включают специфичные праймеры для амплификации ДНК-локусов HLA-аллелей и человеческого гена β-глобина (внутренний контроль) методом ПЦР. Оптимизированные наборы праймеров внесены (в сухом виде) в ячейки 96-луночного микропланшета и готовы для добавления образцов ДНК, Taq-полимеразы с dNTP и буферного раствора (Micro SSP D-mix). Наборы выпускаются в 96-луночном (рекомендуется использовать любой 96-луночный амплификатор от Applied Biosystems) и 384-луночном форматах (требуется амплификатор с термоблоком на 384-лунки).

Чем Micro SSP^® отличается от стандартной технологии SSP?

Micro SSP^® от One Lambda – это полностью оптимизированная технология генотипирования на основе ПЦР: помимо реагентной базы (5 типов тестов) разработаны специальные системы – для переноса 96 образцов в гель одним движением и электрофореза с коротким временем пробега образцов.

Специально разработанная система электрофореза с камерой небольшого размера позволяет существенно экономить реактивы: для анализа 96 образцов Вам необходимо 30 мл агарозного геля и 10 мл ТВЕ-буфера (в 200 раз меньше, чем при использовании стандартной камеры на 96 образцов). Камера имеет 12 держателей для гребенок на 9 лунок. Объем образца, помещающегося в лунку – не более 10 мкл. Однозначный результат (да/нет) уже через 3 минуты! Система предназначается для проведения электрофореза в агарозном геле и имеет 108-луночный формат.

Одно из главных преимуществ системы для электрофореза Micro SSP^® – простая интерпретация результатов анализа. Вам не нужно сопоставлять продукты амплификации и полосы пробега – однозначный результат типирования (наличие/отсутствие продукта ПЦР) за 3 минуты.

Уникальная разработка компании One Lambda – устройство для быстрого переноса 96 образцов из планшета в агарозный гель. Дозатор на 96 образцов позволяет наносить все пробы с планшета в гель одним движением!

• высокая точность нанесения – ошибки при нанесении образцов в гель исключены благодаря специальному трафарету для выравнивания;

• надежность конструкции – иглы выполнены из нержавеющей стали и легко моются;

• возможность калибровки дозатора.

Принцип метода SSP

Метод SSP основан на более эффективном взаимодействии праймеров с ДНК (с последующей амплификацией) при их полной комплементарности, чем при частичном несовпадении. Праймеры подобраны так, что эффективно связываются только с одной аллелью (или с группой аллелей). В процессе ПЦР амплифицируется только полностью комплементарная праймерам ДНК-мишень (позитивный результат). При частичном несовпадении праймеров и ДНК-мишени результаты типирования негативные (амплификации продукта не происходит).

После ПЦР амплифицированные фрагменты ДНК разделяют в агарозном геле. Интерпретация результатов HLA-типирования сводится к однозначному да/нет – присутствие или отсутствие продуктов ПЦР. Поскольку на ПЦР могут негативно влиять различные факторы (ошибки при внесении реагентов, низкое содержание ДНК-мишени в начальной пробе, присутствие ингибиторов и другие), в каждую пробу включен внутренний контроль. Праймеры внутреннего контроля комплементарны консервативному участку человеческого гена β-глобина, присутствующего во всех образцах ДНК человека.

Амплифицированные фрагменты HLA-локусов меньше, чем внутренний контроль, но больше, чем свободные праймеры. Таким образом, позитивные результаты амплификации HLA аллелей или групп аллелей визуализируются в агарозном геле между ДНК внутреннего контроля и свободными праймерами.

Процедура метода SSP

1. Добавить Taq-полимеразу и ДНК в пробирку с D-mix

2. Перенести смесь из пробирок в планшет

3. Провести ПЦР

4. Провести электрофорез

5. Анализ результатов 

Анализ результатов

Программа HLA Fusion позволяет анализировать данные, полученные при использовании наборов One Lambda для HLA-типирования и определения антител. Fusion можно использовать в лабораторных компьютерных сетях т.к. удобная база данных включает: полную информацию о пациенте, историю скрининга антител (LABScreen, FlowPRA, LAT, LCT), генотипирования (rSSO, SSP, SBT), серологического типирования (LMT, Terasaki Tissue Typing trays), типирования KIR и MICA.

Программа включает модули для анализа результатов, полученных при использовании наборов One Lambda: FlowPRA, Micro SSP, LABScreen, LABType, LAT, LCT, и микросфер Quantiplex. Программное обеспечение One Lambda разработано для облегчения анализа результатов и определения HLA. Однако следует помнить, что программа – всего лишь помощник и результаты должны быть тщательно проверены специалистом с опытом HLA-типирования для подтверждения корректности результата.

Уникальное программное обеспечение для HLA-лабораторий

• Единое программное обеспечение для всех типов анализа:

  • Анализ результатов от всех продуктов One Lambda – определения антител и HLA-генотипирования.

• Анализ первичных данных и представление результатов в графическом виде.

• База данных:

  • Полная информация по пациенту.

  • История скрининга антител

  • Генотипирование

  • Серологическое типирование

  • Типирование KIR

  • Типирование MICA.

• Возможности подключения к компьютерной сети:

  • Непосредственное подключение к SQL.

• Регистрация IVD/CE

• Возможность обновления лотов продуктов.

• Сравнение данных “Контроль качества” (QC).

• Возможность создания и печати отчетов.

One Lambda