«Один из главных проектов моей лаборатории состоит в описании и функциональном анализе делящихся врожденных лимфоидных клеток. Эти клетки крайне немногочисленны как в крови, так и в тканях. Для проточной цитометрии мы используем цитометр Attune™ с акустической фокусировкой. Способность цитометра Attune быстро анализовать большие объемы образцов позволяет мне пропустить шаги центрифугирования, и, как следствие, сохранять больше клеток для ускоренной детекции редких событий. Эти исследования мы не смогли провести ни на одном другом приборе».
Профессор Дэвид Казнс
Лейстерский университет
Быстрое и точное детектирование редких событий
Проточный цитометр Attune NxT с акустической фокусировкой — это настольный анализатор, использующий революционную технологию акустической фокусировки для выравнивания потока клеток перед облучением лазером при многоцветной проточной цитометрии. Особенности системы:
- Уникальная модульная конструкция: возможность быстро, не перемещая прибор, встраивать в него дополнительные лазеры (максимум 4) для увеличения числа детектируемых цветов (максимум 14)
- Высокая скорость детекции: короткое время анализа без снижения качества позволяет выявлять редкие события и исключить этапы промывания клеток и лизиса эритроцитов.
- Программное обеспечение для сбора и анализа данных, интуитивно понятное для всех пользователей независимо от уровня подготовки.
- Компактность: вся конструкция поместится даже на небольшом лабораторном столе
Теперь, благодаря гибкости конструкции, включающей до 4 лазеров и до 14 цветов на выбор, новый цитометр Attune NxT можно сконфигурировать под любой набор методик и практически под любой бюджет.
Многоцветный анализ на модульной конструкции: Проточный цитометр Attune NxT с акустической фокусировкой является модульной системой с возможностью выбора до 4 лазеров и до 14 цветов для удовлетворения широкого спектра исследовательских и бюджетных запросов. Цитометр Attune NxT совместим с большинством известных флуорофоров и флуоресцентных белков, что позволяет проводить на нем эксперименты с привычными вам реактивами.
Руководство по выбору флуорофоров для цитометра Attune NxT
|
Лазер |
Возбуждение |
Фильтр эмиссии |
Обычный краситель |
Флуоресцентный белок |
|
Фиолетовый |
405 нм |
450/50 | Pacific Blue |
ECFP |
|
512/25 |
Pacific Green |
|||
|
603/48 |
Pacific Orange |
|||
|
710/50 |
Qdot 705 |
|||
|
Синий |
488 нм |
488/10 |
FSC |
|
|
488/10 |
SSC |
|||
|
530/30 |
FITC |
EGFP, Emerald GFP |
||
|
574/26 |
Propidium iodide |
EYFP |
||
|
590/40 |
Propidium iodide Fluorescent Proteins |
EYFP |
||
|
595/40 |
PerCP-Cy™5.5 |
|||
|
780/60 |
PE-Cy7, Qdot™ 800 |
|||
|
Желтый |
561 нм |
585/16 |
PE |
RFP |
|
620/15 |
PE – Texas Red |
mCherry, dTomato, DsRed, mStrawberry |
||
|
695/40 |
PE-Cy 5.5 |
|||
|
780/60 |
PE-Cy 7 |
|||
|
Красный |
637 нм |
670/14 |
APC |
|
|
720/30 |
Alexa Fluor™ 700 |
|||
|
780/60 |
APC-Alexa Fluor 750 |
При подключении лазера 561 нм прибор приобретает способность детектировать большое количество флуоресцентных белков. Хотите ли вы собрать прибор своей мечты сразу или постепенно достраивая до оптимальной конфигурации, цитометр Attune NxT всегда готов развиваться вместе с вами в соответствии с вашими лабораторными потребностями.
Высокая надежность и максимальная эффективность сигнала: Новая конструкция оптической системы обеспечивает жесткую фиксацию лазеров, направленных точно на ось потока образца, что гарантирует долговременную надежность и воспроизводимость результатов. В цитометр можно встроить до 4 твердотельных лазеров (405, 488, 561 и 637 нм). Лучи лазеров имеют профиль с плоской вершиной (однородность интенсивности излучения в поперечном сечении), что минимизирует погрешности в случае нестабильности проточной (расфокусировка клеток) и оптической (смещение лазера) систем. Свет, излучаемый клетками в проточной ячейке, передается на детекторы посредством оптоволоконных кабелей с высокой эффективностью и минимальными потерями. Непосредственно перед фотоумножителями установлены светофильтры. При необходимости (слишком слабый сигнал, избыточное взаимное влияние флуорофоров) можно заказать светофильтры с нужными параметрами, которые затем легко устанавливаются самостоятельно, без помощи сервисного инженера.
Что такое акустическая фокусировка?
Вместо гидродинамических сил цитометр Attune NxT использует ультразвуковые волны (свыше 2 МГц, аналогичные тем, что применяются в УЗИ), для выстраивания клеток в единую сфокусированную линию вдоль центральной оси капилляра.
-
Акустическая фокусировка в действии. В капиллярную систему цитометра с акустической фокусировкой вносили флуоресцентные микросферы. Без акустической фокусировки частицы двигаются беспорядочно (слева). С применением фокусировки частицы выстраиваются в единую линию (справа).
Эффективность акустической фокусировки практически не зависит от скорости потока образца, что позволяет клеткам фокусироваться строго в точке пересечения с лазером при любом соотношении объемов образца и проточной жидкости. Это, в свою очередь, позволяет улавливать больше фотонов для высокоточного анализа при существенно большей скорости пропускания образца. Для работы цитометра Attune NxT не требуются большие объемы высокоскоростной проточной жидкости, которая может повреждать клетки. Кроме того, волюметрические шприцевые насосы обеспечивают абсолютный подсчет клеток без калибровочных частиц, что минимизирует стоимость и длительность пробоподготовки. Напротив, цитометры, которые используют гидродинамическую фокусировку, поддерживают постоянную линейную скорость образца на всех объемных скоростях потока образца, что приводит к расфокусировке клеток вследствие уширения потока.
Attune Nxt the Band of Acustic Cytometry
Разбавляйте образцы, чтобы не терять качество данных: отмывание клеток и лизис эритроцитов могут привести к серьезным повреждениям и потере клеток. Способность цитометра Attune NxT феноменально быстро собирать данные с образцов большого объема позволяет исключить шаги отмывания клеток и лизиса эритроцитов, что минимизирует потери клеток и существенно упрощает пробоподготовку. Это свойство Attune NxT также чрезвычайно полезно при анализе образцов с очень низкой концентрацией. Анализ разбавленных образцов, таких как спинномозговая жидкость (CSF), стволовые клетки и любые другие образцы c низкой концентрацией клеток, требует много времени. Цитометр Attune NxT быстро анализирует даже очень разбавленные образцы без потери качества данных. Труднополучаемые образцы, такие как кровь или костный мозг мыши, аспираты тонкоигольной биопсии, а также любые другие образцы c малым количеством клеток, можно окрашивать, а затем разводить без отмывания и лизиса эритроцитов. Высокая скорость сбора данных позволяет анализировать до 4 мл образца всего за 4 минуты. Исключение этапа пробоподготовки дает возможность проводить исчерпывающий анализ без риска потери наиболее ценных образцов.
Быстрое детектирование редких событий: для детектирования редких популяций клеток с высокой степенью надежности требуется анализ очень большого количества событий, что значительно увеличивает время сбора данных. Скорость анализа на цитометре Attune NxT в 10 раз выше, чем на других проточных цитометрах, — до 1000 мкл/мин и до 2·100млн событий в рамках одного теста.
|
Сбор данных с более чем 1 миллиона живых клеток и детекция минорной популяции (0,2%) дендритных клеток. Плазмоцитоидные дендритные клетки (pDC) — это специфическая популяция клеток, которые вырабатывают большое количество интерферонов I типа в ответ на вирусную. Эти клетки выявляются по иммунофенотипу CD19–/B220high/CD317+. Для четырехцветного окрашивания спленоцитов мыши использовались конъюгаты антител CD19-Pacific Blue™, CD317-Alexa Fluor 488, CD45R/B220-PE и краситель мертвых клеток SYTOX™ AADvanced™. Гейтирование по сигналу красителя SYTOX AADvanced™ выявило живые клетки, среди которых затем были отобраны клетки CD19–. Двухпараметрический анализ клеток CD19– по CD45R/B220 и CD317 был проведен для выявления клеток pDC. Всего было собрано 1,3 млн клеток при скорости потока 500 мкл/мин и концентрации 7,5・100млн клеток/мл. Плазмацитоидные дендритные клетки были определены как двойные положительные B220+/CD317+ (верхний правый квадрант и составили 0,851% живых клеток CD19–, что соответствует 0,194% всех спленоцитов. |
Это обеспечивает высокую скорость детекции редких событий с достаточной точностью без потерь данных.
Точность и чувствительность для любой скорости потока образца: Цитометр Attune NxT обеспечивает максимальную чувствительность анализа в самых требовательных экспериментах. Точность выравнивания клеток в потоке поддерживается даже при самых высоких скоростях пропускания образца — до 1000 мкл/мин. Это обеспечивается акустической фокусировкой клеток, которая позволяет получать меньшие значения коэффициента вариации (CV) для успешного отделения слабых сигналов от шума (что повышает воспроизводимость результатов) и разделения сигналов, близких по силе, между собой.
Минимальная вариабельность данных: анализ жизненного цикла клеток—лишь один пример эксперимента, в ходе которого крайне важно измерять интенсивность флуоресценции с высочайшей точностью для разделения нескольких популяций клеток. При использовании цитометра Attune NxT вариабельность результатов минимальна вне зависимости от скорости пропускания образца. Вам больше не придется жертвовать пропускной способностью в пользу чувствительности анализа.
|
|||||||||||||||||||||
|
Минимальная вариация данных при высоких скоростях пропускания образца через цитометр Attune NxT: клетки Jurcat фиксировали и окрашивали припидий иодидом, обрабатывали рибонуклеазой и анализировали при концентрации 10млн клеток/мл на цитометре Attune NxT при разных скоростях пропускания. Вне зависимости от скорости пропускания образца ширина пиков G0/G1 и G2/M и коэффициент вариации (CV%) при использовании цитометра Attune NxT остается постоянной, даже при самой высокой скорости 1000мкл/мин. |
Программное обеспечение, соответствующее вашим требованиям: программное обеспечение Attune NxT разработано для интенсивного сбора данных и быстрого анализа результатов с помощью интуитивного интерфейса, в котором легко разберется любой пользователь. Вам не придется просматривать множество окон, все необходимые функции будут под рукой. Параметры экспериментов легко задавать, настраивать и сохранять для будущих исследований. Тесты для автоматического расчета компенсации легко проектируются по встроенному протоколу. Программа способна визуализировать в реальном времени в виде диаграмм очень большие массивы данных (до 20 миллионов событий в образце), обновляя изображение на экране без задержек и зависаний при любых изменениях параметров. Дизайн экспериментов и анализ результатов значительно упрощаются с помощью диспетчера конфигурации фильтров эмиссии (filter configuration manager). Этот инструмент позволяет выбрать из выпадающего списка подходящий флуорофор для любого канала флуоресцентной детекции. Списки флуорофоров могут быть дополнены пользователем. При анализе данных название выбранных флуорофоров отображаются в подписи к осям диаграмм.
Сервис и поддержка: цитометр Attune NxT имеет техническую поддержку и участвует в сервисных программах по всему миру. Мы сосредоточены на индивидуальной поддержке с момента визита нашего специалиста по продукции и на протяжении всего срока эксплуатации прибора. В комплектацию цитометра Attune NxT включен расширенный годовой сервисный контракт, который включает:
• Исчерпывающее обучение (2 пользователя на прибор)
• Методическая поддержка
• Техническая поддержка по всему миру
• Плановое обслуживание
|
Цитометр Attune NxT с акустической фокусировкой |
|||
|
Количество лазеров |
Цвета лазеров |
Количество анализируемых параметров |
Артикул |
|
4 |
Синий, красный, желтый, фиолетовый |
16 |
A24858 |
|
3 |
Синий, фиолетовый, желтый |
16 |
A24859 |
|
3 |
Синий, красный, фиолетовый |
13 |
A24860 |
|
2 |
Синий, желтый |
9 |
A24861 |
|
2 |
Синий, фиолетовый |
10 |
A24862 |
|
2 |
Синий, красный |
9 |
A24863 |
|
1 |
Синий |
6 |
A24864 |
Дополнительная информация www.thermofisher.com/attune
Письмо-объяснение относительно распространения действия технического регламента