Особенности применения и сравнение результатов иммуногистохии и FISH метода вызывают определенные вопросы. Поэтому в данной статье мы решили более подробно рассказать о методе FISH и сравнить его с методом иммуногистохимии на примере.
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) – цитогенетический метод обнаружения, идентификации и определения местоположения определенной последовательности ДНК в хромосоме или конкретных хромосом с помощью специфических зондов, меченных флуорохромами.
В чем сходство между гибридизацией in situ и иммуногистохимией?
Хотя эти две методики разные, они имеют и много общего:
- ISH и IHC являются высоко специфическими реакциями.
- Обе методики отличаются высокой точностью.
- Можно использовать в диагностике онкологии и генетических заболеваний.
- Являются быстрыми методами, обеспечивающими воспроизводимые результаты.
- ISH и IHC используют такие методы обнаружения, как радиомечения и флуоресценция.
Но именно FISH метод имеет более широкие возможности для диагностики хромосомных аберраций за счет большей специфичности метода и широкого перечня доступных зондов ДНК для диагностики.
Преимущества FISH диагностики
Метод FISH является золотым стандартом для оценки ключевых биомаркеров таких, как перегруппировка HER2, BCR/ABL1, ALK и циклина D1 и играет решающую роль в подборе целевой таргетной терапии. С помощью FISH можно идентифицировать хромосомные перестройки примерно у 80% пациентов, в то время как классическая цитогенетика может идентифицировать хромосомные аберрации только у 40-50% пациентов.
Из-за низкой скорости пролиферации опухолевых клеток на ранней стадии множественной миеломы кариотипирование метафазных клеток и иммуногистохимия не могут выявить первичные геномные аберрации в неделящихся опухолевых клетках. Поэтому именно FISH, эффективный для анализа интерфазных ядер и малых хромосомных аберраций, признан наиболее надежным генетическим тестом для характеристики известных цитогенетических аномалий у хронических гематобластозов.
Основные преимущества методики:
- Быстрота. Позволяет провести исследование через 72 часа и выдать результат пациенту.
- Универсальность. Возможность проведения исследований на разных типах образцов: цитологических и гистологических.
- Высокая точность. FISH метод является золотым стандартом диагностики и установления диагноза злокачественных новообразований. Точность метода достигает 98%, в редких случаях приравнивается к NGS.
- Простота. Метод прост в применении, методика легко овладевает специалистами лаборатории.
- Имеются общепринятые методики оценки результатов, количественный метод оценки.
- Высокая специфичность. FISH позволяет установить диагноз при опухолевых процессах с длительным хроническим течением (миелоидный лейкоз). Опухоли с низкой скоростью пролиферации будут отрицательными при IHC исследованиях.
FISH метод в диагностике рака
Метод используется для:
1. Диагностика новообразований.
- для дифференциальной диагностики разных типов цветов (диспластический невус/меланома и др.);
- установление молекулярного типа опухоли;
- определение мутаций конкретной опухоли, на основе чего подбирается целевая терапия.
2. Прогнозирование протекания заболевания.
- установление тех или иных мутаций в исследуемых опухолях позволяет спрогнозировать течение болезни, агрессивность, медиану продолжительности жизни.
3. Пренатальная и IVF диагностика.
- диагностика генетических патологий человека у пренетальный и постнатальный период.
Распространенность рака и геномных аномалий быстро растет. По данным Национального института рака, ожидается, что в 2024 году в Европейском Союзе будет диагностировано около 1 806 590 новых случаев рака. Согласно тому же источнику, примерно 606 520 человек умрут от онкологии. Кроме того, по данным Центра по контролю и профилактике заболеваний США, по состоянию на октябрь 2021 года в Соединенных Штатах каждый из 33 младенцев имеет врожденный порок. Таким образом, ожидается, что рост распространенности геномных аномалий и рака будет способствовать росту спроса.
По результатам отчета «Molecular Oncology Diagnostics Market – Global and Regional Analysis: Focus on Product, Technology, Application, Cancer Type, End User, and Region – Analysis and Forecast, 2022-2032” отмечается значительный рост спроса на молекулярную диагностику онкологических заболеваний в мире, что связано с увеличением уровня онкологических заболеваний, увеличением среднего уровня жизни населения, глобальной урбанизацией и быстрым развитием фармакологической индустрии в области персонализированной медицины.
В 2021 году мировой рынок молекулярной онкологической диагностики оценивался в 3620,6 миллиона долларов США, а к 2032 году ожидается, что он достигнет 12130,5 миллиона долларов США, что свидетельствует об увеличении на 11,43% в течение прогнозируемого периода 2022-2032 годов.
Особое развитие ожидает область диагностики меланомы, поскольку в последние годы регистрируется стремительный рост заболевания среди развитых стран. Ожидается, что мировой рынок диагностики рака меланомы будет расти в прогнозируемый период с 2023 по 2030 год. Исследование рынка данных Data Bridge анализирует, что рынок растет на 7,2% в период с 2023 по 2030 год и, как ожидается, достигнет 7525,28 млн дол. США к 2030 году.
Именно поэтому метод FISH диагностики становится не просто важным аспектом диагностики онкологии, но и ключевым методом оценки состояния при выборе лечения.
Сравнительная таблица методов FISH и иммуногистохимии
Иммуногистохимия | FISH | |
 |  | |
Антитела связываются со специфическими антигенами/белками, создавая качественный результат. | Меченые зонды связываются со специфическими последовательностями ДНК, создавая количественный результат. | |
Диагностика HER-2 позитивной Ca молочной железы | ||
Ложноотрицательные результаты Точность 65%. 44% случаев негативного результата IHC стали позитивными за FISH. | Золотой стандарт диагностики HER-2. Точность 95%. | |
Диагностика ALK позитивной Ca легких | ||
| Специфичность метода составляет 79,52%. | Специфичность 99,32% с единым анализом, клинически одобренным FDA. | |
Диагностика ROS позитивной Ca легких | ||
| Чувствительность 33%, специфичность 54%. Возможно ложнопозитивные результаты, FISH и ПЦР есть референтными. | Лучшая интерпретация результатов, более объективный метод, золотой стандарт.
| |
BCR/ABL1 при хроническом миелоидном лейкозе | ||
| Точность составляет около 40-50%. | Золотой стандарт, точность более 80%. | |
AML-M3 слияние при промиелоцитарном лейкозе | ||
| Для диагностики промиелоцитарного лейкоза используют окрашивание миелопероксидазой, положительный результат возможен и без слияния генов AML-M3. | FISH используется для установления слияния генов, при положительном результате – лучший прогноз выживаемости. | |
PML-RARА слияние; CBFB-MYH1 при промиелоцитарном лейкозе | ||
| Не диагностируется | Специфичность 100%. По выявленным данным мутации прогноз хороший Хотя APML часто подозревается на основании клинической картины, а также результатов морфологической и проточной цитометрии, окончательный диагноз требует выявления слияния PML-RARA. В случае обнаружения слияния данных генов, таргетная терапия третиноином в случае точной диагностики дает 100% ремиссию. | |
DEK / NUP214 при промиелитоцитарном лейкозе | ||
| Не диагностируется | Высокоспецифический анализ. При обнаружении данных мутации прогноз плохой | |
С-МЕТ за СА легких | ||
| Определяется у 80% случаев | Определяется у 98% случаев | |
Информационный каталог продуктов для цитогенетический диагностики by Leica Biosystems вы сможете найти по ссылке.