Тонкослойная хроматография

Тонкослойная хроматография – это метод хроматографии, который широко используется в синтетической химии метод для идентификации соединений, определения их чистоты и отслеживания хода реакции. Исследование методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) проводится на листе инертной подложки, в роли которой выступают стекло, пластик или алюминиевая фольга, покрытая тонким слоем адсорбирующего материала, например, целлюлозы, силикагеля или оксида алюминия (глинозема). Слой адсорбента называют «стационарной фазой». После нанесения образца на пластину, растворитель или смесь из нескольких растворителей («подвижная фаза») вытягивается вверх по пластине посредством капиллярного эффекта.

Подготовка пластины

В качестве стационарной фазы на стеклянную пластину, металл или пластиковую пленку тонким слоем (около 0,25 мм) наносится специальная тонкоизмельченная матрица (силикагель, глинозем или аналогичный материал). Чтобы облегчить присоединение к предметному стеклу, к стационарной фазе также добавляется связующее вещество. Чтобы упростить дальнейшую визуализацию флуоресцентный порошок (например, ярко-зеленый, подготовленный к воздействию ультрафиолетового излучения) часто смешивают с неподвижной фазой.

Чтобы получить воображаемую стартовую линию с каждой стороны пластины делаются отверстия. Тонкую линию можно также нарисовать карандашом. Стартовая линия должна находиться на расстоянии 0,5-1 см от нижней части пластины.

Опыт

Небольшое количество растворителя (подвижная фаза) помещается в контейнер. Уровень растворителя должен быть ниже начальной линии ТСХ, иначе пятна растворятся. Тонкий конец капилляра опускают на в пластину на линии старта. После того, как начнется действие растворителя, пятно наносится на то же место несколько раз. Таким образом получается небольшое концентрированное пятно.

Тонкий конец пластины помещают в разбавленный раствор, который сразу начнет подниматься в верх под действием капиллярного эффекта. Растворитель (элюент) перемещается вверх. При этом компоненты образца перемещаются с различной скоростью по причине различия степени взаимодействия с матрицей (стационарная фаза) и растворимости в развивающемся растворителе.

Стоит избегать выделения большого объема материала, так как это увеличит «хвост» и значительно ухудшит качество разделения. Пятна должны быть достаточно далеко от краев пластины и друг от друга. Если возможно, следует определить состав или смесь вместе с исходными материалами и возможными промежуточными продуктами на пластине. Они будут служить внутренним ориентиром, так как каждая пластина ТСХ немного отличается.

Растворитель поднимается вверх по пластине, следует не допустить, чтобы растворитель достиг ее края. Когда до края пластины остается 1-2 см, она вынимается из сосуда, на ней отмечается степень распространения растворителя. Затем пластину оставляют, чтобы растворитель полностью испарился. Получившиеся в ходе хроматографии тонкослойной пятна на пластине отмечают маркером.