Спектрофлуориметрия

Спектрофлуориметрия (флуориметрия, флуоресцентная спектроскопия) – это разновидность электромагнитной спектроскопии, которая изучает флуоресценцию исследуемого образца.

При исследовании нативных белковых структур методы рентгеновской кристаллографии и электронной микроскопии часто не могут успешно установить динамику взаимосвязи структуры и функции белка. Флуоресцентная спектроскопия менее инвазивна с точки зрения сохранения нативной структуры белков при изучении их трехмерных конформаций. Этот метод использует явление возбуждения электронов при столкновении с высокоэнергетическими частицами, такими как фотоны и другие возбужденные электроны, и испускания фотонов при снижении их энергии до основного состояния.

Молекулы, проявляющие флуоресцентную активность, называются флуорофорами. В биофизических исследованиях макромолекул, таких как белки и нуклеиновые кислоты, они выступают в качестве физического маркера для их структурных исследований. Флуорофоры могут быть либо внешними, как радиоактивные зонды и красители, либо внутренними, как специфические аминокислоты в белковых цепях. Внутренние флуорофоры менее дороги и не требуют никакого вмешательства, как при работе с внешними флуорофорами.

Приборы для проведения спектрофлуориметрии обязательно предполагает использование луча света, обычно ультрафиолетового, который возбуждает электроны в молекулах определенных соединений и заставляет их излучать свет.

Обычно, но не обязательно, это свет в видимом диапазоне. Для получения информации о концентрации и химической среде соединений в исследуемом образце в спектрофлуорометре нужно выбрать определенную длину волны возбуждения.

Излучение может иметь одну длину волны, либо несколько (спектр излучения), для определения последнего выполняется специальное сканирование.