Реагенты Micro SSP™ - это линия тестов для HLA-типирования с использованием специфических праймеров (SSP), включающая тесты низкого разрешения (Generic), тесты высокого разрешения (High Resolution), аллель-специфичные тесты (Allele Specific), тесты для определения одной аллели (Singles) и тесты для прояснения неоднозначных результатов серологического типирования (Seramates).
Преимущества технологии Micro SSP® от компании One Lambda
Содержание наборов Micro SSP®
Наборы Micro SSP® включают специфичные праймеры для амплификации ДНК-локусов HLA-аллелей и человеческого гена β-глобина (внутренний контроль) методом ПЦР. Оптимизированные наборы праймеров внесены (в сухом виде) в ячейки 96-луночного микропланшета и готовы для добавления образцов ДНК, Taq-полимеразы с dNTP и буферного раствора (Micro SSP D-mix). Наборы выпускаются в 96-луночном (рекомендуется использовать любой 96-луночный амплификатор от Applied Biosystems) и 384-луночном форматах (требуется амплификатор с термоблоком на 384-лунки).
Чем Micro SSP® отличается от стандартной технологии SSP?
Micro SSP® от One Lambda - это полностью оптимизированная технология генотипирования на основе ПЦР: помимо реагентной базы (5 типов тестов) разработаны специальные системы - для переноса 96 образцов в гель одним движением и электрофореза с коротким временем пробега образцов.
Специально разработанная система электрофореза с камерой небольшого размера позволяет существенно экономить реактивы: для анализа 96 образцов Вам необходимо 30 мл агарозного геля и 10 мл ТВЕ-буфера (в 200 раз меньше, чем при использовании стандартной камеры на 96 образцов). Камера имеет 12 держателей для гребенок на 9 лунок. Объем образца, помещающегося в лунку - не более 10 мкл. Однозначный результат (да/нет) уже через 3 минуты! Система предназначается для проведения электрофореза в агарозном геле и имеет 108-луночный формат.
Одно из главных преимуществ системы для электрофореза Micro SSP® - простая интерпретация результатов анализа. Вам не нужно сопоставлять продукты амплификации и полосы пробега - однозначный результат типирования (наличие/отсутствие продукта ПЦР) за 3 минуты.
Уникальная разработка компании One Lambda - устройство для быстрого переноса 96 образцов из планшета в агарозный гель. Дозатор на 96 образцов позволяет наносить все пробы с планшета в гель одним движением!
Принцип метода SSP
Метод SSP основан на более эффективном взаимодействии праймеров с ДНК (с последующей амплификацией) при их полной комплементарности, чем при частичном несовпадении. Праймеры подобраны так, что эффективно связываются только с одной аллелью (или с группой аллелей). В процессе ПЦР амплифицируется только полностью комплементарная праймерам ДНК-мишень (позитивный результат). При частичном несовпадении праймеров и ДНК-мишени результаты типирования негативные (амплификации продукта не происходит).
После ПЦР амплифицированные фрагменты ДНК разделяют в агарозном геле. Интерпретация результатов HLA-типирования сводится к однозначному да/нет - присутствие или отсутствие продуктов ПЦР. Поскольку на ПЦР могут негативно влиять различные факторы (ошибки при внесении реагентов, низкое содержание ДНК-мишени в начальной пробе, присутствие ингибиторов и другие), в каждую пробу включен внутренний контроль. Праймеры внутреннего контроля комплементарны консервативному участку человеческого гена β-глобина, присутствующего во всех образцах ДНК человека.
Амплифицированные фрагменты HLA-локусов меньше, чем внутренний контроль, но больше, чем свободные праймеры. Таким образом, позитивные результаты амплификации HLA аллелей или групп аллелей визуализируются в агарозном геле между ДНК внутреннего контроля и свободными праймерами.
Процедура метода SSP
Анализ результатов
Программа HLA Fusion позволяет анализировать данные, полученные при использовании наборов One Lambda для HLA-типирования и определения антител. Fusion можно использовать в лабораторных компьютерных сетях т.к. удобная база данных включает: полную информацию о пациенте, историю скрининга антител (LABScreen, FlowPRA, LAT, LCT), генотипирования (rSSO, SSP, SBT), серологического типирования (LMT, Terasaki Tissue Typing trays), типирования KIR и MICA.
Программа включает модули для анализа результатов, полученных при использовании наборов One Lambda: FlowPRA, Micro SSP, LABScreen, LABType, LAT, LCT, и микросфер Quantiplex. Программное обеспечение One Lambda разработано для облегчения анализа результатов и определения HLA. Однако следует помнить, что программа - всего лишь помощник и результаты должны быть тщательно проверены специалистом с опытом HLA-типирования для подтверждения корректности результата.
Уникальное программное обеспечение для HLA-лабораторий