05.09.2022
Использование гематоксилина и эозина (H&E) является лучшим способом просмотра частей клеточной и тканевой структуры. Изменение интенсивности цвета часто зависит от опыта врача-патолога и его личных предпочтений при окрашивании: правильно подобранные красители демонстрируют широкие характеристики цитоплазмы, ядерного и внеклеточного матрикса. Почти все обучающие тесты выбирают изображение H&E. Сегодня мы продолжаем использовать эти простые и важные красители, которые остаются неизменными уже больше века.
Рис.1: Кожа H&E. Ядра окрашены в фиолетовый цвет, а цитоплазматические компоненты – в розовый.
Что такое эозин и H&E покраска?
Окрашивание гематоксилином и эозином применяются во многих процессах гистологических лабораторий, включая окраску криосрезов, образцов после тонкоигольной аспирации и срезов фиксированных и залитых в парафин тканей.
Чтобы лучше понять, что делает образец хорошо окрашенным, важно понимать компоненты красителя.
Гематоксилин - для чего нужен?
Гематоксилин используется для изображения ядерных деталей в клетках. Глубина окраски связана не только с количеством ДНК в ядрах, но и с продолжительностью времени, которое образец производит в гематоксилине.
Гематоксилин относительно простой в изготовлении красителем. Сам краситель извлекается из дерева Haematoxylum campechianum. Окисление гематоксилина производит гематеин, являющийся фактическим красителем, который используется для окрашивания H&E. Добавление протравы улучшает способность гематеина присоединяться к анионным (отрицательно заряженным) компонентам тканей.
Читайте также. Гематоксилин: что мы знаем о нем?
Рис .2: На этом изображении крупноклеточной анапластической медуллобластомы гематоксилин играет ключевую роль в диагностике. Обратите внимание на митотические фигуры, указывающие на быстро растущую опухоль. В клетках также отмечается ядерная нерегулярность и скопление хроматина.
Гематоксилины обычно классифицируются по протраве, которая используется перед окрашиванием. Протравы усиливают положительный ионный заряд гематеина. Это способствует связыванию гематеина с анионным компонентом ткани, которым чаще всего является хроматин. Тип протравы также влияет на конечный цвет окрашеных компонентов. Самой распространенной протравой, используемой в рутинной гистологии, является сульфат алюминия аммония (квасцы). Эта протрава вызывает красную окраску ядер, которая затем меняется на более привычный синий цвет, когда образец позже промывается слабым основным раствором.
Гематоксилин Майера – это широко используемый краситель, который можно применять как для прогрессирующих, так и для регрессивных окрасочных методов. Он часто используется в качестве ядерного контрастного красителя для специальных красок и иммуногистохимии.
Гематоксилин Харриса — еще один широко используемый квасцовый гематоксилин, который можно применять для прогрессивного окрашивания цитологических образцов, а также для прогрессивного или регрессивного окрашивания в гистологии. Покраска, как правило, обеспечивает четкие ядерные детали. Одним из затруднений при использовании Харриса является то, что его лучше дифференцировать с помощью слабой кислоты, в отличие от более широко используемых дифференциаторов на основе соляной кислоты. Гаррис – протрава на спиртовой основе.
Гематоксилин Gill – квасцовый гематоксилин. Его можно использовать как для прогрессивной, так и для регрессивной окраски в разных концентрациях. Поскольку он производится из воды и этиленгликоля, это предотвращает автоокисление окраски в течение месяцев, что делает его более стабильным, чем гематоксилин Harris.
Эозин - как устроен?
Рассмотрев ядерные красители, поговорим о красителях цитоплазматической составляющей. Эозин является контрастным красителем, различающим цитоплазму и ядра клеток. Он, как правило, розовый, с разными оттенками розового для разных типов волокон соединительной ткани.
Eosin Y является наиболее часто используемой формой эозина и может применяться как в воде, так и спирте. Добавление небольшого количества уксусной кислоты также усилит окрашивание. Эозин с добавлением флоксин образует красные оттенки, которые можно увидеть во время H&E окрашивания. Для тех, кто хочет видеть более насыщенный красный цвет, можно добавить флоксин.
Рис.3. Ядра на этом изображении контрастируют с цитоплазмой и эритроцитами в кровеносном сосуде. Обратите внимание на интенсивность эритроцитов по сравнению с розовым цветом цитоплазмы окружающих клеток.
Смеси эозина
Иногда используются другие смеси эозина, например EA50 и EA65. Эти красители в основном используются для цитологии, и кроме eosin Y содержат светло-зеленый, желтоватый и коричневый цвет Бисмарка. Добавление этих двух красителей обеспечивает вариации цвета цитоплазмы от бледно-голубого до розового, что лучше заметно в плоских клетках мазка Папаниколау. Концентрацию смеси определяет значение 50 или 65.
Рис.4: На этом изображении мазка Папаниколау пациента с плоскоклеточным раком можно оценить разнообразие окраски цитоплазмы. Красная стрелка указывает на злокачественное ядро с очень малым количеством цитоплазмы. Черная стрелка иллюстрирует нормализованную клетку острого воспаления, сходную по размеру эритроцитов на предыдущем изображении. Обратите внимание, насколько больше злокачественная клетка по сравнению с нормальными ядрами на предыдущем изображении.
Дифференциация красителей позволяет выборочно удалять пятна из тканей в зависимости от предпочтений специалиста. В случае гематоксилина чаще используют соляную кислоту (для быстрой дифференциации) и уксусную кислоту (для медленной, более контролируемой дифференциации).
Реагенты для усыпления, такие как водопроводная вода Скотта, используются для изменения гематоксилина с красного на ожидаемый традиционный синий цвет. Эти растворы химически изменяют краситель, чтобы вызвать образование такого цвета. В некоторых местах водопроводная вода содержит достаточное количество минеральных веществ, поэтому рН позволяет подсинивать ядра без необходимости в специальном усиняющем реагенте. Однако в большинстве случаев лаборатории обычно добавляют этот шаг, чтобы обеспечить соответствующую окраску.
Красители для H&E: где купить?
Покраска гематоксилином и эозином (H&E) – самый распространенный способ окраски, применяемый в гистологических и гистопатологических лабораториях. При правильном выполнении этот метод обладает способностью демонстрировать широкий спектр нормальных и аномальных компонентов клеток и тканей, несмотря на то, что это относительно простая покраска на парафиновых или замороженных срезах. В гистопатологии большую часть случаев заболевание может диагностировать именно опытный врач-патолог, используя только окраску H&E.
Гематоксилин и эозин делятся на разновидности, каждая из которых имеет свои преимущества и недостатки. Некоторые лаборатории предпочитают готовить собственные растворы, в то время как другие выбирают готовые к использованию коммерческие продукты.
Компания Leica Biosystem предлагает гематоксилин, эозин и другие красители для гистологических и цитологических исследований разной модификации и в разных фасовках. Узнать больше и заказать нужный краситель Вы всегда можете у нас.
Будьте в курсе новостей