Быстрые тесты на гемоглобин Seratec

Сложность постановки метода анализа ДНК в рамках криминалистической экспертизы, а также, к сожалению, его высокая стоимость приводят к тому, что эксперт-биолог нуждается в быстрой, точной, чувствительной и недорогой скрининговой тест-системе для анализа пятен потенциальных биологических жидкостей для принятия решения о необходимости дальнейшего анализа ДНК.

Помочь в решении этого вопроса призваны экспресс-тесты разработанные по принципу биосенсора по технологии иммунохимического анализа. В основе данной технологии лежит высокоспецифичная и высокочувствительная иммунная реакция антигена с антителами. Визуализация взаимодействия достигается путем «пришивки» к взаимодействующей паре визуализирующих маркеров различной природы – флуоресцентных зондов, красителей и пр.

К достоинствам данного метода тестирования можно отнести его:

• Скорость и простоту определения;
• Возможность использования для массовых анализов в полевых условиях;
• Несложная пробоподготовка;
• Высокая точность;
• Не требуется дорогостоящей аппаратуры.
• Скорость и простоту определения;
• Возможность использования для массовых анализов в полевых условиях;
• Несложная пробоподготовка;
• Высокая точность;
• Не требуется дорогостоящей аппаратуры.

Именно по пути создания биосенсора на основе иммунохимического анализа пошли специалисты немецкой компании SERATEC при разработке быстрых тестов на наличие человеческих физиологических жидкостей. В данный момент компанией разработано три теста – по определению наличия человеческих крови, семенной жидкости и слюны.

Определение человеческой крови в рамках данного теста основано на специфическом взаимодействии моноклональных мышиных (в качестве активных компонентов теста и контроля) антител против одного из мажорных белков человеческой крови – гемоглобина (hHb). Концентрация гемоглобина в крови мужчин 120-160 мг/мл крови, женщин – 140-180 мг/мл. Применение теста на гемоглобин для подтверждения наличия крови человека может быть ограничено только двумя факторами: во-первых следы гемоглобина могут присутствовать в других телесных жидкостях (моче, семенной жидкости, вагинальной жидкости, стуле, слюне) и приводить к ложно-положительным результатам. Во-вторых, беря во внимание высокие концентрации гемоглобина в крови, возможно возникновение т.н. прозонового эффекта. Данная проблема легко решается путем разведения гемоглобина до меньших концентраций в буферном растворе.

Визуализация результатов теста довольна проста и достигается путем маркировки антитела взаимодействия коллоидом золота: в случае положительного результата в окне теста появляются две окрашенные полосы – контроля (тест проведен методологически правильно) и результата (кровь человеческая). При негативном результате проявляется только полоса контроля правильности проведения теста. В случае методологически неправильного проведения теста или его непригодности к использованию не проявляется контрольная полоса или происходит окрашивание только области «тест» (см. рисунок).

Иммунохроматографический тест подтверждающий наличие простатического специфического антигена (ПСА) в пробе. ПСА – гликопротеин синтезирующийся в простате, откуда он поступает в семенную жидкость. Поскольку данный антиген в больших количествах содержится именно в семенной жидкости, тест может быть использован в судебно-биологической экспертизе для выявления следов спермы. Положительный результат наступает при появлении полосы результата, легко определяемой визуально. Отличие данного теста от аналогичного ему теста на определение наличия человеческой крови состоит в том, что PSA Semiquant имеет полосу внутреннего стандарта сконструированную таким образом, что позволяет полуколичественно определить концентрацию концентрации ПСА путем сравнения цветовой интенсивности внутреннего стандарта с полосой результата.

При правильной пробоподготовке в случае положительного результата в окне теста появляются три (!) окрашенные полосы – контроля (тест проведен методологически правильно), внутреннего стандарта (интенсивность окрашивания данной полосы позволяет определить концентрацию ПСА в исследуемой пробу) и результата (наличие семенной жидкости человека). При негативном результате проявляются только полосы контроля правильности проведения теста и внутреннего стандарта.

Результат недействителен если полоса внутреннего стандарта и/или контроля не образуется.

Известно, что ферменты группы амилаз являются основными участниками процесса пищеварения. В частности α-амилаза является ферментом слюнных желез и поджелудочной железы. Ииммунохроматографическое тестирование человеческой слюны основано именно на определении α-амилазы в исследуемой пробе. Следует отметить, что в данном случае возможно кросс-реагирование с панкреатической α-амилазой.

Визуализация результатов аналогична предыдущим двум тестам: в случае положительного результата в окне теста появляются две окрашенные полосы – контроля (тест проведен методологически правильно) и результата (слюна человеческая). При негативном результате проявляется только полоса контроля правильности проведения теста. В случае методологически неправильного проведения теста или его непригодности к использованию не проявляется контрольная полоса или происходит окрашивание только области «тест» (см. рисунок).

В случае проведения теста на наличие слюны возможно проведение дополнительного теста на наличие в пробе ПСА (детекция наличия семенной жидкости): буфер, оставшийся в пробирке после разведения амилазы, может быть использован для определения наличия ПСА после надлежащего разведения. Данный факт может быть полезным в случае если подозревается оральный контакт параллельно с иным способом проникновения.

Таким образом в рамках судебно-биологической экспертизы SERATEC обеспечивает современные криминалистические лаборатории быстрыми, точными, чувствительными и недорогими инструментами скрининга наличия в анализируемой пробе крови человека/семени/слюны.