Мультиплексные ПЦР тест-системы и технологии их обеспечивающие

Технологическая новизна мультиплексных тест-систем заключается в их возможности определять несколько объектов-мишеней за один тест. Это достигается использованием уникального набора праймеров, который в сочетании со специально подобранными условиями проведения реакции позволяет определять (качественно или количественно) в режиме реального времени наличие в анализируемом образце нескольких типов инфекционных агентов или генетических маркеров одновременно.

С каждым годом число стандартных лабораторных показателей и количество анализов в расчете на одного пациента неуклонно растет, что повышает нагрузку на клинические лаборатории и требует расширения парка лабораторного оборудования. В то же время увеличивается объем биологического материала, необходимого для успешного проведения назначенных пациенту исследований. Например, у пациента отделения реанимации и интенсивной терапии суммарный объем крови, взятой для проведения лабораторных исследований, может достигать 150 мл и более. Отдельную проблему составляет получение достаточного количества крови в педиатрической практике.

Другой актуальной проблемой является соблюдение клиническими лабораториями высоких требований к качеству проведения исследований и расширение парка оборудования по мере роста диагностических потребностей медицинского учреждения. Однако, большинство из них не может позволить себе содержать большое количество лабораторной техники и тем более организовать работу нескольких территориальных лабораторий. Для успешного решения освещенных выше проблем требуется универсальное высокопроизводительные решения, способные заменить одновременно несколько тестов и для исследования любого биоматериала.

Поэтому, точность, универсальность, высокая пропускная способность и экономия биоматериала обусловливают особенную привлекательность применения технологии мультиплексности в клинико-диагностических лабораториях. В ближайшем будущем мультиплексные ПЦР тест-системы будут играть очень важную роль в клинической практике. Можно надеяться, что широкое внедрение мультиплексного анализа поможет не только улучшить технические показатели существующих лабораторных тестов, но и решить многие клинические проблемы на новом уровне.

SEEGENE

Компания Seegene на сегодняшний день является ведущим мировым разработчиком мультиплексных технологий для клинических молекулярной диагностики. В планах развития компании предусматривается выпуск целого ряда инновационных мультиплексных диагностических систем для ПЦР. Основными технологиями позволяющими компании Seegene занять лидирующее место среди производителей аналогичной продукции являются следующие революционные разработки.

Технология DPO™

DPO™ – технология особой составной конструкции праймеров – компонента ПЦР отвечающего за высокую специфичность всего метода.

Благодаря данной технологии этап отжига праймеров на матрицу ДНК происходит в два этапа.

Этим значительно снижается неспецифическое связывание праймеров в ненужных участках матрицы ДНК, предотвращается образование шпилек и димеров праймеров, а также эффективно преодолевается проблема комплементации праймеров с участками, содержащими множественные повторы (ATATAT) и пробеги (ACGGGGGGATGGGG).

Обычные праймеры обеспечивают специфичность при высокой температуре отжига, при низкой температуре отжига и образуются побочные неспецифичные продукты. В то же время DPO™ праймеры продуцирует только один продукт-мишень независимо от температуры при изменении температуры отжига. 

 

Технология TOCE™

(Tagging Oligonucleotide Cleaved & ExtensionTOCE™) – технология особой сложной конструкции флуоресцентных зондов (отличной от технологии TaqMan) – компонента ПЦР отвечающего за высокую чувствительность всего метода.

Принцип технологии TOCE™

Технология TOCE™ позволяет одновременно идентифицировать несколько целевых мишеней в одном канале. Для обнаружения присутствия целевых мишеней сигнал измеряется в реальном времени и анализируется по температуре плавления Catcher-зонда (Catcher-Tm).

Catcher-зонд является одной из уникальных особенностей TOCE™. Он представляет собой флуоресцентно меченный искусственно синтезированный ДНК-зонд, который генерирует сигнал для каждой целевой последовательности. Значение Catcher-Tm можно контролировать, регулируя последовательность и длину Catcher-зонда. Для оптимизации анализа TOCE ™ значение Catcher-Tm может быть легко отрегулировано и не ограничено целевой последовательностью.

Именно благодаря данной технологии принципиально реализуется критерий мультиплексности, расширяющий функциональные возможности (канальность) регистрирующих аппаратных систем с 2-3 до 15!

Ни одно из существующих в мире приборно-реагентных решений не способно выявлять одномоментно в одном образце больше 6 мишеней. По анализу температуры плавления амплифицированной ДНК из образца с помощью протокола cCMTA TOCE™ технология позволяет получать полуколичественные данные результата ПЦР до 15 мишеней.

 

Комментарии

комментарий...

Понравилась статья? facebook 0 linkedin 0 google+ 0

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *