Мультиплексные ПЦР тест-системы и технологии их обеспечивающие

Технологическая новизна мультиплексных ПЦР тест-систем заключается в их возможности определять несколько объектов-мишеней за один тест. Это достигается использованием уникального набора праймеров, который в сочетании со специально подобранными условиями проведения реакции позволяет определять (качественно или количественно) в режиме реального времени наличие в анализируемом образце нескольких типов инфекционных агентов или генетических маркеров одновременно.

С каждым годом число стандартных лабораторных показателей и количество анализов в расчете на одного пациента неуклонно растет, что повышает нагрузку на клинические лаборатории и требует расширения парка лабораторного оборудования. В то же время увеличивается объем биологического материала, необходимого для успешного проведения назначенных пациенту исследований. Например, у пациента отделения реанимации и интенсивной терапии суммарный объем крови, взятой для проведения лабораторных исследований, может достигать 150 мл и более. Отдельную проблему составляет получение достаточного количества крови в педиатрической практике.

Другой актуальной проблемой является соблюдение клиническими лабораториями высоких требований к качеству проведения исследований и расширение парка оборудования по мере роста диагностических потребностей медицинского учреждения. Однако, большинство из них не может позволить себе содержать большое количество лабораторной техники и тем более организовать работу нескольких территориальных лабораторий. Для успешного решения освещенных выше проблем требуется универсальное высокопроизводительные решения, способные заменить одновременно несколько тестов и для исследования любого биоматериала.

Поэтому, точность, универсальность, высокая пропускная способность и экономия биоматериала обусловливают особенную привлекательность применения технологии мультиплексности в клинико-диагностических лабораториях. В ближайшем будущем мультиплексные ПЦР тест-системы будут играть очень важную роль в клинической практике. Можно надеяться, что широкое внедрение мультиплексного анализа поможет не только улучшить технические показатели существующих лабораторных тестов, но и решить многие клинические проблемы на новом уровне.

SEEGENE

Компания Seegene на сегодняшний день является ведущим мировым разработчиком мультиплексных технологий для клинических молекулярной диагностики. В планах развития компании предусматривается выпуск целого ряда инновационных мультиплексных тест-системы для ПЦР диагностики. Основными технологиями позволяющими компании Seegene занять лидирующее место среди производителей аналогичной продукции являются следующие революционные разработки.

Технология DPO™

DPO™ – технология особой составной конструкции праймеров – компонента ПЦР отвечающего за высокую специфичность всего метода.

тест системы для пцр диагностики

Благодаря данной технологии этап отжига праймеров на матрицу ДНК происходит в два этапа.

тест системы для пцр диагностики

Этим значительно снижается неспецифическое связывание праймеров в ненужных участках матрицы ДНК, предотвращается образование шпилек и димеров праймеров, а также эффективно преодолевается проблема комплементации праймеров с участками, содержащими множественные повторы (ATATAT) и пробеги (ACGGGGGGATGGGG).

мультиплексная пцр

Обычные праймеры обеспечивают специфичность при высокой температуре отжига, при низкой температуре отжига и образуются побочные неспецифичные продукты. В то же время DPO™ праймеры продуцирует только один продукт-мишень независимо от температуры при изменении температуры отжига. мультиплексная пцр

мультиплексная пцр

 

Технология TOCE™

(Tagging Oligonucleotide Cleaved & ExtensionTOCE™) – технология особой сложной конструкции флуоресцентных зондов (отличной от технологии TaqMan) – компонента ПЦР отвечающего за высокую чувствительность всего метода.

Принцип технологии TOCE™

пцр тест системы

пцр тест системы

пцр тест системы

пцр тест системы

Технология TOCE™ позволяет одновременно идентифицировать несколько целевых мишеней в одном канале. Для обнаружения присутствия целевых мишеней сигнал измеряется в реальном времени и анализируется по температуре плавления Catcher-зонда (Catcher-Tm).

Catcher-зонд является одной из уникальных особенностей TOCE™. Он представляет собой флуоресцентно меченный искусственно синтезированный ДНК-зонд, который генерирует сигнал для каждой целевой последовательности. Значение Catcher-Tm можно контролировать, регулируя последовательность и длину Catcher-зонда. Для оптимизации анализа TOCE ™ значение Catcher-Tm может быть легко отрегулировано и не ограничено целевой последовательностью.

Именно благодаря данной технологии принципиально реализуется критерий мультиплексности, расширяющий функциональные возможности (канальность) регистрирующих аппаратных систем с 2-3 до 15!

пцр тест системы

Ни одно из существующих в мире приборно-реагентных решений не способно выявлять одномоментно в одном образце больше 6 мишеней. По анализу температуры плавления амплифицированной ДНК из образца с помощью протокола cCMTA TOCE™ технология позволяет получать полуколичественные данные результата ПЦР до 15 мишеней.